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New pharmaceutical formulations from nanotechnology for cancer treatment based on gene therapy strategies
Figura 1. Transporte al interior del núcleo para acceder a la maquinaria de transcripción nuclear (13).
La transferrina es sintetizada en el sistema retículo 2. MATERIAL Y MÉTODOS
endotelial (S.R.E.), pero principalmente en el hígado, por
lo que el proceso de endocitosis mediada por receptor ha 2.1. Material
sido descrito especialmente en los hepatocitos. Los
lipoplejos con transferrina han demostrado ser una 2.1.a. Material génico
prometedora estrategia de focalización (4). Existe
sobreexpresión de este receptor en la superficie de las El ADN plasmídico (ADNp) utilizado que contiene el
células tumorales, por lo que su utilización como ligando gen de la luciferasa bajo el promotor del citomegalovirus
estaría más que justificado para obtener tratamientos más (CMV) pCMV-Luc (VR-1216) es de Promega Corporation
específicos. Otra estrategia ha sido la utilización de (EE.UU.). Su crecimiento se llevó a cabo en Escherichia
asialofetuína, una proteína que se une a las partículas coli y su purificación utilizando Quiagen EndoFree®
mediante la unión por interacciones electrostáticas. Las Plasmid Giga Kit (Alemania), de acuerdo con el protocolo
fenestraciones del endotelio de los capilares del hígado son del fabricante, como se explica en el apartado de
ventajosas a la hora de direccionar las partículas. Las “métodos”.
células del parénquima (hepatocitos) tienen
asialoglicoproteínas, receptores capaces de reconocer 2.1.b. Productos y reactivos
cadenas de galactosa. La asialofetuína es una molécula de
glicoproteína que posee varias cadenas del azúcar En la elaboración de los liposomas se utilizaron los
galactosa, lo cual implica un reconocimiento específico lípidos catiónicos 1,2- Dioleoiloxi-3-(trimetilamonio)
entre la asialofetuína y los receptores de propano (DOTAP) de Avanti Polar Lipids, Alabaster, AL
asialoglicoproteínas de los hepatocitos (11). Estos (EE.UU.) y colesterol de Sigma-Aldrich (EE.UU.). Para la
receptores se encuentran sobreexpresados en el caso de un elaboración de las distintas formulaciones de lipoplejos se
hígado enfermo, por lo tanto es una estrategia interesante utilizaron los ligandos transferrina humana, de Becton
en el tratamiento del cáncer de hígado (6). En general, la Dickinson (EE.UU.), y asialofetuína y el péptido
terapia génica es una estrategia prometedora para el protamina, ambos de Sigma-Aldrich (EE.UU.). La
tratamiento del cáncer, que requiere de dos entidades cuantificación del ADNp se realizó utilizando el
principales, el gen terapéutico y vector responsable de su NanoDrop™ ND-1000 de Thermo Fisher Scientific Inc.
transporte y entrega en la célula diana de forma intacta. (EE.UU.). Para formular los poliplejos se utilizó
Aunque hay una variedad de vectores disponibles que polietilenimina ramificada de 25 kDa de Aldrich Chemical
muestran una eficaz transferencia genética en cultivos Company, Inc (EE.UU.). En los ensayos de viabilidad se
celulares, la entrega eficiente y la especificidad in vivo utilizó el reactivo “Alamar Blue” de Accumed
sigue siendo el principal objetivo a alcanzar (12). International Companies (Westlake, OH, EE.UU.).
2.1.c. Cultivos celulares
Las células HepG2 (hepatocarcinoma humano), HeLa
(cáncer cérvico-uterino humano) y CT-26 (cáncer de colon
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