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Stem cells and their exosomes as an advanced therapy to treat incisional hernia: proof of concept in a murine model

analizados fueron IL-4 (ID: 16189), IL-13 (ID: 16163), paramétricas. Para variables no paramétricas, se llevó a
Arg-1 (ID: 11846), iNOS (ID: 18126), MCP1 (ID: 20296), cabo el test de Kruskal-Wallis, seguido del test de
MIP-1a (ID: 20302), Opn (ID: 20750), Wt1 (ID: 22431), comparaciones múltiples de Dunn cuando se encontraron
Efemp1 (ID: 216616), Col1a1 (ID: 12842) y Col3a1 (ID: diferencias significativas entre grupos. Los datos se
12825). expresan como la media ± desviación estándar (SD,
standard deviation). Todos los valores de p=0.05 se
La qRT-PCR se llevó a cabo utilizando sondas consideraron estadísticamente significativos.
TaqMan en el equipo 7300 Real-Time PCR System
(Applied Biosystems, Thermo Fisher Scientific Inc.). Los 3. RESULTADOS
productos de PCR se cuantificaron mediante el cálculo de
2-?Ct. Todas las muestras (n=4 por grupo) se analizaron 3.1. Fenotipo y capacidad de diferenciación de las células
separadamente utilizando el gen de la gliceraldehído 3- madre mesenquimales murinas
fosfato deshidrogenasa (GAPDH, ID: 14433) como
housekeeping. El análisis mediante citometría de flujo de los
diferentes marcadores de superficie de las MSCs murinas
2.11. Análisis estadístico derivadas de médula ósea mostraron un perfil fenotípico
CD29+/CD44+/CD90+/CD105+/MHC-I+/MHC-II– (Tabla
Los datos se analizaron con el software SPSS-21 1). Además, el ensayo de diferenciación adipogénica,
(SPSS, Chicago, IL, USA) mediante ANOVA de un factor condrogénica y osteogénica permitió demostrar la
seguido del test de Tukey cuando se encontraron multipotencialidad de las células (Figura 1).
diferencias significativas, en el caso de variables

Figura 1. Multipotencialidad de las MSCs murinas derivadas de médula ósea. Diferenciación adipogénica
(A), condrogénica (B) y osteogénica (C) de las MSCs murinas cultivadas durante 21 días con medios específicos de
diferenciación. Las diferenciaciones adipogénica, condrogénica y osteogénica se evidenciaron mediante tinción con Oil Red
O, Alcian Blue y Alizarin Red S, respectivamente, y visualización mediante microscopía óptica. Escala: 100 µm.

Tabla 1. Perfil de expresión de los diferentes marcadores de superficie analizados mediante citometría
de flujo en las MSCs murinas.

Marcador CD29 CD44 CD90 CD105 MHC-I MHC-II

MRFI* ++ ++ ++ + ++ -

*MRFI =2 (-), 2 - 10 (+), 10 - 100 (++). citometría de flujo, se encontró una expresión positiva del
marcador exosomal CD9 (MRFI=4.63). Finalmente, en el
3.2. Caracterización del concentrado de exosomas aislado análisis de rastreo de nanopartículas se obtuvo un tamaño
a partir de las células madre mesenquimales murinas medio de las partículas de 131.6±52.2 nm. En cuanto a su
concentración, esta fue de 3.96×1011±1.02×1010
Los sobrenadantes del cultivo de las MSCs, partículas/ml. La representación detallada del tamaño de
enriquecidos hasta 50 veces, se caracterizaron mediante partículas frente a su concentración se muestra en la Figura
cuantificación de proteína total, análisis de rastreo de 2.
nanopartículas y citometría de flujo.

La determinación de proteína total en estos
concentrados mediante ensayo de Bradford resultó en
valores de 20 000 µg/ml. En cuanto al análisis mediante

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