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Estudio
de
asociación
epigenómica
en
la
pérdida
de
peso…

Todos
los
sujetos
dieron
su
consentimiento
informado
por
escrito

(http://www.clinicaltrials.gov;
NCT01087086),
el
estudio
fue
aprobado
por
el

Comité
de
Ética
de
la
Universidad
de
Navarra
(065/2009)
y
estuvo
de
acuerdo
con

la
Declaración
de
Helsinki
(revisada
en
Corea
del
Sur
en
2008).

Evaluaciones
antropométricas
y
bioquímicas

Las
medidas
antropométricas
(peso,
talla,
circunferencia
de
cintura
y

cadera)
se
llevaron
a
cabo
con
los
sujetos
en
ropa
interior.
El
peso
corporal
se

midió
con
una
precisión
de
0,1
kg
con
una
Tanita
SC-­-330,
(Tanita
Corp,
Japón).
La

talla
se
estimó
con
un
tallímetro
(Seca
713
modelo,
Postfach,
Alemania)
con
una

precisión
de
1
mm.
El
índice
de
masa
corporal
(IMC)
se
calculó
como
el
peso

corporal
dividido
por
la
altura
al
cuadrado
(kg/m2).
Las
circunferencias
de
la

cintura
y
la
cadera
se
midieron
siguiendo
protocolos
validados
(28).
La
grasa

corporal
total
se
midió
por
impedancia
bioeléctrica
Tanita
SC-­-330
(TanitaCorp,

Japón)
y
por
absorciometría
con
rayos
X
de
doble
energía
(DXA)
(Prodigy,
versión

de
software
6,0,
Madison,
WI)
como
se
describió
previamente(28).

Las
concentraciones
séricas
de
glucosa,
colesterol
total,
lipoproteínas
de

alta
densidad-­-colesterol
(HDL-­-c)
y
triglicéridos
se
midieron
en
un
autoanalizador

Pentra
C-­-200
(HORIBA
ABX,
Madrid,
España)
con
los
kits
específicos.
Las

concentraciones
de
insulina
se
determinaron
mediante
un
kit
de
ensayo

inmunoenzimático
(Mercodia,
Uppsala,
Suecia)
en
un
autoanalizador
Triturus

(Grifols
SA,
Barcelona,
España).

Extracción
de
ADN

Muestras
de
sangre
venosa
se
recogieron
al
inicio
del
estudio
para
la

obtención
de
ADN.
El
ADN
genómico
fue
extraído
utilizando
el
kit
de
purificación

de
ADN
Master
Purefor
Blood
Version
II
(Biotecnologías
Epicenter,
Madison,
WI,

EE.UU.)
y
se
almacenó
a
-­-80°C
hasta
su
procesamiento.

Determinación
de
patrones
de
metilación
de
ADN

El
perfil
epigenético
del
ADN
genómico
fue
analizado
en
48
individuos

seleccionados
del
estudio
RESMENA-­-S
utilizando
el
ensayo
de
metilación
Human

Methylation
450
BeadChip
(Illumina,
San
Diego,
CA)
conteniendo
más
de
485.000

sitios
CpGs
individuales.
Brevemente,
500
ng
de
ADN
genómico
tratado
con

bisulfito
sódico
(EZ
DNA
Methylation™
Kit;
Epitect,
Qiagen)
fue
amplificado,

marcado,
hibridado
con
sondas
metiladas
y
no
metiladas
y
escaneado
de
los

microarrays
en
la
plataforma
HiScanSQ
de
Illumina,
Inc.
El
análisis
de
imagen
y

determinación
de
la
señal
de
las
sondas
se
realizó
usando
el
software
Genome

Studio,
Módulo
de
metilación
(Illumina,
Inc).

Los
datos
de
metilación
en
un
sitio
CpG
concreto
se
obtuvieron
a
partir
de

las
intensidades
de
señal
para
la
sonda
metilada
(M)
y
la
no
metilada
(U)
para
ADN

genómico
en
esa
posición.
Así,
los
nivel
de
metilación
(ß)
fueron
calculados
como
la

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