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LUIS A. OLIVOS-ORÉ Y COLS. AN. R. ACAD. NAC. FARM.
Los resultados aparecen expresados como media ± error están-
dar de la media (ESM) para un determinado número (n) de expe-
rimentos. La comparación entre las medias correspondientes a dis-
tintos grupos de experimentos se realizó mediante el test de la t de
Student. En todos los casos los niveles de significación estableci-
dos fueron P < 0,001 (***); P < 0,01 (**) ó P < 0,05 (*). Los valores
de P superiores a 0,05 se han considerado como no significativos
(ns).
3. RESULTADOS
3.1. Reproducibilidad de las corrientes inducidas por
acetilcolina en las células cromafines de la rata
La estimulación repetida o prolongada de los nAChRs ocasiona
su desensibilización, en la que intervendrían factores como el tipo
de receptor, la concentración y el tipo de agonista, la concentración
de Ca2+ intracelular y diversas proteínas cinasas y fosfatasas intra-
celulares.
Con la finalidad de minimizar la desensibilización de los nAChRs
empleamos un sistema de administración de fármacos y soluciones
salinas diseñado en nuestro laboratorio, que constaba de cinco tu-
bos de polietileno de 250 µm de diámetro con una salida común (Fi-
gura 2A). Además, el flujo a través de cada uno de los tubos estaba
regulado por electroválvulas, lo que permite realizar aplicaciones de
fármacos durante tiempos muy cortos. En la Figura 2B, se muestra
la corriente que fluye a través de una micropipeta de patch-clamp
rellena con una solución salina fisiológica (NaCl al 0,9%) y bañada
por una solución externa de idéntica composición cuando el Vh es
de 2 mV. La administración local de un pulso de 100 ms de una so-
lución salina diluida (NaCl al 0,2%) determina un cambio —reduc-
ción— de la corriente que se produce con una latencia de 100 ms
respecto al comienzo de la aplicación y tarda 30 ms en completar-
se (tiempo de recambio). Como se muestra en la Figura 2C, la ad-
ministración con este dispositivo de pulsos de acetilcolina (100 µM)
de 100 ms de duración a intervalos de 45 s dio lugar a respuestas
de corriente con magnitudes muy reproducibles.
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