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VOL. 73 (1), 27-45, 2007 EL CAMBIO CONFORMACIONAL EN EL TCR DETECTA...

II. En timocitos, la estimulación con un agonista fuerte
II. induce el cambio conformacional en el TCR

En un contexto fisiológico, el ligando natural del TCR es un
péptido enmarcado en una molécula de MHC propia. Por lo tanto,
era importante confirmar que la inducción del cambio conformacio-
nal observado en células T maduras e inmaduras utilizando el anti-
cuerpo APA1/1 también ocurría cuando se estimulaba con un MHC-
péptido. Se utilizaron ratones transgénicos para el TCR OT-I (12).
Este TCR está restringido para el MHC H2-kb y sus ligandos tanto
agonista (OVAp) como agonista parcial/antagonista (E1) están am-
pliamente descritos (12). Para mimetizar la presentación antigénica,
se utilizaron dímeros de H2-kb:Ig (Figura 6A).

Se aislaron células T de bazo de ratones OT-I y se estimularon
durante 24 horas con los dímeros H2-kb:Ig cargados con el péptido
agonista OVAp o con el agonista parcial/antagonista E1 y adsorbidos
a plástico. Posteriormente, se detectó la expresión del marcador de
activación CD69 por citometría de flujo comprobándose que la esti-
mulación con los dímeros H2-kb:Ig cargados con OVAp inducían la
expresión en superficie de CD69, mientras que la estimulación con
los dímeros de H2-kb sin péptido o cargados con el péptido agonista
parcial/antagonista E1 no inducen la expresión de dicho marcador
de activación (15). Se confirmó que en este sistema y a esas concen-
traciones, el péptido OVAp actúa como agonista y el E1 no. Utilizan-
do el mismo conjunto de H2-kb:Ig para estimular timocitos (Figu-
ra 6B) y células T de ganglio de ratones OT-I (15), se observó que la
intensidad media de la fluorescencia para APA1/1 aumentaba tras
la estimulación con los dímeros cargados con OVAp (Figura 6B,
línea continua), comparado con los dímeros vacíos (Figura 6B, línea
sombreada) o cargados con el péptido E1 (Figura 6B, línea discon-
tinua). Estos resultados indican que el cambio conformacional de-
tectado por la exposición del epítopo de APA1/1 en la cadena CD3e
se induce tras la estimulación con un agonista fuerte del TCR tanto
en células T maduras como inmaduras.

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