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RUTH M. RISUEÑO y BALBINO ALARCÓN AN. R. ACAD. NAC. FARM.

2. Reactivos

2a. Péptidos

Los péptidos OVAp (SIINFEKL), E1 (EIINFEKL) y HA307-319 (pép-
tido utilizado como irrelevante, PKYVKQNTLKLAT) fueron sinteti-

zados por el método FMOC en los servicios de apoyo a la investiga-

ción del CBMSO (CSIC-UAM, Madrid).

2b. Anticuerpos

El anticuerpo anti-fosfotirosinas 4G10 fue adquirido a Upstate
Biotechnology (Lake Placid, NY), mientras que el hibridoma produc-
tor del anticuerpo anti-CD3ed/e? 145-2C11 es de ATCC (Rockville,
MD). Los anticuerpos anti-CD4 biotinilado (L3T4), anti-CD69FITC
(H1.2F3), anti-CD8a biotinilado (53-6.7) y el anticuerpo anti-CD90.2
(53-2.1) proceden de BD-Pharmingen (San Diego, CA). Tanto el an-
ticuerpo policlonal anti-CD3? 448 (13) como el monoclonal anti-
CD3e APA1/1 (14) son de producción propia. Actualmente, el anti-
cuerpo monoclonal APA1/1 está siendo comercializado por Upstate
Biotechnology (Lake Placid, NY) y BD Pharmingen (San Diego, CA).
El anticuerpo anti-H2-kb:OVAp 25D1.16 fue donado por la Doctora
M. del Val (ISCIII, Madrid).

Los anticuerpos secundarios acoplados a la actividad peroxida-
sa son de Amersham Pharmacia Biotech (Piscataway, NJ). Los anti-
cuerpos y estreptavidinas utilizadas acopladas a los fluoróforos FITC,
PE y Cy5 proceden de Southern Biotech (Birmingham, AL), mien-
tras que los acoplados a Alexa488, proceden de Molecular Probes
(Eugene, OR).

2c. Purificación de las proteínas de fusión GST-SH3.1

El plásmido pGEX-4T1-GST-SH3.1 (cedidos por el Doctor R. Geha,
Harvard Medical School, Boston) fue transformado en la cepa de
E. coli XL1-blue. La purificación y acoplamiento a Glutation-sefarosa
(Amersham, Piscataway, NJ) se realizó de acuerdo a las instrucciones
del fabricante.

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