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V. ESTEPA; S. RÓDENAS; M.C. MARTÍN ANAL. REAL ACAD. FARM.

secundarios procedentes de la descomposición de hidroperóxidos, y la
reacción de estos productos con el TBA.

Utilizamos el tampón HCl-glicocola a pH = 3,5 para crear las
condiciones óptimas de pH. Este tampón es propuesto por ASAKAWA y
MATSUSHITA (11), autores que apoyan su utilización, a partir de un
estudio pormenorizado de varias disoluciones tampón. En su estudio lleva
a cabo la reacción a varios pHs, y bajo las mismas condiciones de
temperatura y tiempo, con la adición de tricloruro de Fe (III). Las
intensidades de color más altas se obtuvieron con tres tampones:
glicocola-HCl, glicocola-OHNa y acetato, siendo más nítido el color
obtenido con el tampón glicocola-HCl a pH = 3,5.

Respecto al método original se ha variado el tiempo de reacción de
15 a 60 minutos a una temperatura de 95º C, para alcanzar una máxima
coloración tanto en las muestras como en el TEP que se utilizó como
patrón externo. Además se ha introducido un paso previo, manteniendo la
mezcla de reacción a una temperatura de 5º C durante 60 minutos en la
oscuridad. Este sistema de reacción conduce a resultados más
reproducibles que si se procede a llevar a ebullición directamente como
pudimos constatar experimentalmente (%CV = 8,3 vs. %CV = 18,6).
Otros autores también proponen una etapa previa de reacción antes de
llevar la mezcla de reacción hasta el punto de ebullición (14, 15), dada la
mayor reproducibilidad de la técnica.

4.- Método de extracción

Para determinar el sistema de extracción idóneo probamos dos
mezclas de reactivos:

MEZCLA (A): 1 mL de ácido acético conc. + 2 mL de cloroformo
conc., según el método de ASAKAWA y MATSUSHITA (11).

MEZCLA (B): 0,5 mL de agua + n-butanol-piridina 15:1 (V/V)
2,5 mL, según el método de OHKAWA y col. (9).

Utilizando una mezcla de sueros como muestra control, se
analizaron por duplicado diez alícuotas de la mezcla de sueros utilizando
el reactivo de extracción (A) y, también por duplicado, diez alícuotas

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