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M. PEREA FALOMIR Y COLS. ANAL. REAL ACAD. FARM.

varias poblaciones de receptor. Sin embargo, como apuntó Weber (26), la
detección de dos sitios de unión con estudios de enlace en equilibrio
requiere que el ligando tenga una afinidad diferente para los dos sitios de
unión. La magnitud de la razón entre afinidades necesaria para discernir
entre ellos depende de la variación experimental y las densidades relativas
de los dos sitios receptores

Al caracterizar la cinética de unión ligando-receptor fueron
detectadas heterogeneidades , lo que podría indicar la existencia de dos
sitios de unión que no aparecieron en los estudios de enlace en equilibrio.
Al detectarse a través de los datos iniciales que el enlace podría no estar
adscrito a ningún tipo de receptor conocido, se desarrolló una estrategia
para la diferenciación de modelos de enlace basado sólo en sus
propiedades cinéticas. Para este propósito Motulsky y Mahan (10)
desarrollaron un método cinético utilizando ligandos selectivos. Cada uno
de estos métodos necesitan algún conocimiento de los sitios de unión,
tejidos y ligandos .

Basándonos solamente en los datos cinéticos este método nos
permitirá discriminar entre modelos de unión y estimar los parámetros de
enlace. A partir de ensayos de asociación y disociación los datos
experimentales pueden ser ajustados simultáneamente a modelos con
cinéticas mono o bifásicas con la ayuda de un programa informático
específicamente creado en el departamento para la ocasión, y con los
mismos métodos de optimización que los aplicados en el proceso de
minimización de la función cuadrática objetivo en la función de Stenberg.

La cantidad de ligando asociado a los sitios de unión saturables en el
tiempo t (Bass,t) depende de las constantes de velocidad de asociación (k1)
y disociación (k-1), así como de la cantidad de ligando libre (L) y la
concentración total de sitios de unión (Bmax), de acuerdo a la eq. (10) :

Bass,t = Bmax · ???1 - e -( k1 ·( L )+ k -1 )·t ? (10)
??
1+ k-1
k1 · (L)

Deducción de la ecuación de Karlsson

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