Page 68 - Demo

La vacuna pPAL-Sfs + pPAL-N protegi%u00f3 frentea la cepa Wuhan y la variante Delta. La qRTPCR y los ensayos de PFU demostraron que lavacuna previno la diseminaci%u00f3n viral hacia %u00f3rganos como el coraz%u00f3n y el cerebro, implicados en efectos secundarios graves de laCOVID-19 (19). La protecci%u00f3n fue completa incluso en animales con t%u00edtulos bajos de anticuerpos espec%u00edficos. Adem%u00e1s, esta protecci%u00f3nse mantuvo tres meses despu%u00e9s de la vacunaci%u00f3n.Por tanto, la vacuna induce inmunidad duradera y protecci%u00f3n completa frente a SARSCoV-2. Est%u00e1 lista para avanzar a ensayoscl%u00ednicos en humanos.5. CoNClUSI%u00f3NEn resumen, la administraci%u00f3n hom%u00f3loga depPAL-Sfs + pPAL-N (20 %u03bcg de cada pl%u00e1smido pordosis), disuelto en agua est%u00e9ril y administradopor v%u00eda intramuscular con electroporaci%u00f3n invivo, confiere protecci%u00f3n completa frente a undesaf%u00edo con 10%u2075 PFU del aislado Wuhan-Hu-1(MAD6) y de la variante Delta. La vacuna induce una respuesta Th1, linfocitos T CD8%u207a polifuncionales citot%u00f3xicos y producci%u00f3n deanticuerpos neutralizantes. Esta vacuna deADN es segura, f%u00e1cil de producir a escala industrial y apta para distribuci%u00f3n y almacenamiento a temperatura ambiente.6. REFERENCIaS1. Richner JM, Himansu S, Dowd KA, Butler SL,Salazar V, Fox JM, et al. Modified mRNAVaccines Protect against Zika Virus Infection.Cell. 2017;169(1):176.2. Pardi N, Hogan MJ, Pelc RS, Muramatsu H,Andersen H, DeMaso CR, et al. Zika virusprotection by a single low-dose nucleosidemodified mRNA vaccination. Nature.2017;543(7644):248-51.3. Reynolds CJ, Gibbons JM, Pade C, Lin KM,Sandoval DM, Pieper F, et al. Heterologousinfection and vaccination shapes immunityagainst SARS-CoV-2 variants. Science.2022;375(6577):183-92.modificado (Sfs) para evitar el corte por furina. C%u00e9lulas HEK293 transfectadas con pPALSfs + pPAL-N expresaron adecuadamente lasversiones optimizadas de los genes Sfs y N. Ratones C57BL/6J vacunados con dos dosisde pPAL-Sfs + pPAL-N mediante electroporaci%u00f3n produjeron una robusta respuesta humoral con IgGs espec%u00edficas frente a la prote%u00edna Sy su dominio RBD. El an%u00e1lisis de subclases mostr%u00f3 predominancia de IgG2c, lo que indica unarespuesta Th1. Este perfil Th1 favorece elaclaramiento viral (35), mientras que un sesgoTh2 se ha asociado con enfermedad severa(36, 7). Tambi%u00e9n se generaron anticuerposneutralizantes, lo que sugiere una protecci%u00f3nefectiva (38,39).Las respuestas de c%u00e9lulas T tambi%u00e9n sonesenciales frente a la infecci%u00f3n por SARS-CoV2. Se ha observado correlaci%u00f3n entre recuperaci%u00f3n y fuerte respuesta T, especialmenteCD8%u207a (40%u201342). La vacunaci%u00f3n con pPAL-Sfs +pPAL-N activ%u00f3 linfocitos T espec%u00edficos frente alos ant%u00edgenos S y N. Se evaluaron cuatro marcadores funcionales: CD107a, IFN-g, IL-2 y TNF-a.Se detectaron c%u00e9lulas CD4%u207a y CD8%u207a citot%u00f3xicas,siendo estas %u00faltimas m%u00e1s polifuncionales. M%u00e1sdel 50% de las CD8%u207a espec%u00edficas de S expresaban dos o m%u00e1s citoquinas, lo cual es indicativode efectores polifuncionales (44).En cambio, las CD8%u207a espec%u00edficas de N mostraron menor polifuncionalidad y fenotipo puramente citot%u00f3xico. Las CD4%u207a frente a S y Ntambi%u00e9n expresaron CD107a, indicando capacidad citot%u00f3xica. La presencia de CD4%u207a citot%u00f3xicas espec%u00edficas para SARS-CoV-2 ha sidoreportada y se asocia con protecci%u00f3n en infecciones como la fiebre del Nilo Occidental (43).Una cuesti%u00f3n interesante es el papel de losanticuerpos anti-N no neutralizantes, que pueden facilitar el aclaramiento viral en virus envueltos (45%u201347). Se ha descrito recientementeque la ligasa E3 TRIM21 puede dirigir la prote%u00edna N hacia la degradaci%u00f3n proteasomal mediante estos anticuerpos, estimulandorespuestas T citot%u00f3xicas efectivas (15). Estoapoya la inclusi%u00f3n del gen N en la formulaci%u00f3nvacunal.190ANALESRANFwww.analesranf.coman. R. acad. Farm.vol. 91. n%u00ba2 (2025) %u00b7 pp. 173-192The non-replicative DNA vaccine, pPAL-S + pPAL-N,free of antibiotic resistance genes, confers completeprotection in mice against SARS-CoV-2Pedro J. Alcolea, Jaime Larraga et al.