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significativa de ARN viral en todos los %u00f3rganos(Figura 6D). En la mayor%u00eda, no se detect%u00f3 ARNen d%u00eda 14.Los niveles de virus infeccioso fueron indetectables en la mayor%u00eda de los tejidos de losratones vacunados (Figura 6E). Solo 2 de 5 ratones presentaron virus en pulm%u00f3n (d%u00eda 7), y 3de 5 en coraz%u00f3n (d%u00eda 4), con cargas significativamente menores (2,2 %u00d7 10%u00b3 vs 9 %u00d7 10%u00b3 PFU/g). En el cerebro, el virus solo fue detectableen los controles. Estos datos indican que la vacunaci%u00f3n control%u00f3 completamente la replicaci%u00f3n viral y previno la diseminaci%u00f3n sist%u00e9mica.(Figura 6A). Los t%u00edtulos de neutralizaci%u00f3n tambi%u00e9n fueron elevados, salvo en un rat%u00f3n. Trasel desaf%u00edo intranasal con una dosis letal (10%u2075PFU) de la cepa MAD6, los ratones vacunadosno perdieron peso, a diferencia de los controles, que comenzaron a perder peso a partir deld%u00eda 3 (Figura 6B). Los signos cl%u00ednicos tambi%u00e9nse redujeron significativamente (Figura 6C), ytodos los controles debieron ser sacrificadosantes del d%u00eda 7. Subgrupos de cinco ratones sesacrificaron en los d%u00edas 4, 7 y 14 post-desaf%u00edopara evaluar carga viral por qRT-PCR y ensayode placas en pulm%u00f3n, coraz%u00f3n y cerebro. Losratones vacunados presentaron una reducci%u00f3n188ANALESRANFwww.analesranf.coman. R. acad. Farm.vol. 91. n%u00ba2 (2025) %u00b7 pp. 173-192The non-replicative DNA vaccine, pPAL-S + pPAL-N,free of antibiotic resistance genes, confers completeprotection in mice against SARS-CoV-2Pedro J. Alcolea, Jaime Larraga et al.Figura 8. la vacuna pPal-Sfs + pPal-N confiere una protecci%u00f3n completa contra el desaf%u00edo con 105 PFU de lavariante delta del SaRS-Cov-2 en el modelo murino K18-haCE2. (a) titulaci%u00f3n de anticuerpos circulantes anti-RbdIgg, Igg2c y neutralizantes 15 d%u00edas despu%u00e9s de la inmunizaci%u00f3n de cebado/refuerzo con pPal-Sfs + pPal-N. (b)Evoluci%u00f3n del peso corporal despu%u00e9s de 105 PFU SaRS-Cov-2 desaf%u00edo. los animales vacunados mantuvieron su pesodurante todo el experimento, mientras que el peso disminuy%u00f3 en el grupo de control. (C) Seguimiento de signoscl%u00ednicos tras provocaci%u00f3n con 105 PFU SaRS-Cov-2. la inferencia estad%u00edstica se realiz%u00f3 mediante la prueba t deStudent aplicando el ajuste del valor p por el m%u00e9todo de Holm-Sidak (( = 0,05; *p<0,05; **p<0,01; ***p<0,001).