Page 22 - Demo

20ANALESRANFwww.analesranf.comD%u00e9ficit de factor V y terapias avanzadasAntonio Liras et al.An. R.Acad. Farm.Vol. 91. n%u00ba1 (2025) %u00b7 pp. 17-44un vector viral en un organismo se hanrealizado estudios anatomopatol%u00f3gicosmediante an%u00e1lisis histopatol%u00f3gicos y deinmunohistoqu%u00edmica, utilizando complejosmedios iconogr%u00e1ficos con el empleo demicroscopia %u00f3ptica y de fluorescencia de altaresoluci%u00f3n.No menos importantes han sido los estudiosin silico que han permitido llegar muy lejosantes de iniciar los experimentos realesreduciendo tambi%u00e9n as%u00ed el numero de animalesde experimentaci%u00f3n. Para ello se han utilizadobases de datos de mutaciones humanas yrepositorios cient%u00edficos; bases de datosgen%u00e9ticos y de genoma de ratones;herramientas de alineamiento de secuenciasm%u00faltiples; herramientas de predicci%u00f3n deefectos de variantes; algoritmos para predecirel impacto funcional de mutaciones;servidores web de modelado de homolog%u00eda 3Dde prote%u00ednas; an%u00e1lisis de impacto demutaciones en la estabilidad de prote%u00ednas;software de visualizaci%u00f3n de gr%u00e1ficosmoleculares y repositorios para visualizaci%u00f3nonline de modelos 3D.Por las caracter%u00edsticas particulares de esteproyecto que est%u00e1 estrechamente relacionadocon la coagulaci%u00f3n sangu%u00ednea, se han utilizadoan%u00e1lisis hematim%u00e9tricos desde los par%u00e1metrost%u00edpicamente de rutina de hemograma hasta losestudios espec%u00edficos de coagulaci%u00f3n como hasido la cuantificaci%u00f3n del tiempo deprotrombina (TP), del tiempo detromboplastina parcial activada (TTPa) o lamedida de la actividad y niveles de factor V.Pero realmente las t%u00e9cnicas que condicionanel %u00e9xito de objetivos en terapias avanzadashan sido tres las imprescindibles, todas ellasbiotecnol%u00f3gicas por excedencia. As%u00ed, laSecuenciaci%u00f3n de Nueva Generaci%u00f3n (NGS) queofrece la secuenciaci%u00f3n r%u00e1pida y precisa degrandes secuencias de material gen%u00e9tico,analizando m%u00faltiples fragmentos de ADNsimult%u00e1neamente, lo que le da un alto nivel dedetalle, precisi%u00f3n y velocidad. Esto nos hapermitido la detecci%u00f3n de mutaciones en elgen F5 y el genotipado del genoma deanimales. Tambi%u00e9n las m%u00e1s modernas t%u00e9cnicasde reproducci%u00f3n asistida como ha sido lamicroinyecci%u00f3n en cigotos que nos hapermitido la obtenci%u00f3n de modelos animalescon una determinada mutaci%u00f3n en el gen F5.Y, por %u00faltimo, y la t%u00e9cnica estrella, la edici%u00f3ng%u00e9nica mediante el sistema CRISPR (ClusteredRegularly Interspaced Short PalindromicRepeats o Repeticiones Palindr%u00f3micas CortasAgrupadas y Regularmente Espaciadas), quepermite realizar modificaciones muy precisasen el ADN. Ha posibilitado la inducci%u00f3n demutaciones concretas en el genoma, larecuperaci%u00f3n y correcci%u00f3n de mutaciones y laproducci%u00f3n de modelos animales transg%u00e9nicoscon mutaciones en el gen F5, mediante lamicroinyecci%u00f3n de los componentes delsistema CRISPR en el propio cigoto parainducir la mutaci%u00f3n.1.3. La bio%u00e9tica y la significaci%u00f3n estad%u00edsticacomo condiciones sine qua non para lainvestigaci%u00f3nLa %u00e9tica en investigaci%u00f3n es una condici%u00f3n sinequa non para desarrollar cualquier laborinvestigadora tanto con la utilizaci%u00f3n demuestras humanas como en el uso de animalesde experimentaci%u00f3n. As%u00ed en relaci%u00f3n conmuestras humanas se han respetado en todomomento las directrices de la Declaraci%u00f3n deHelsinki y los experimentos se aprobaronsiempre por los comit%u00e9s de %u00e9tica deinvestigaci%u00f3n en los centros hospitalarios y deinvestigaci%u00f3n en los que se obten%u00edan muestraso se realizaba la experimentaci%u00f3n. Seobtuvieron los consentimientos informados detodos los pacientes participantes en el estudioen el momento de la toma de muestras desangre con fines cl%u00ednicos. Estos estudios seaprobaron por el Comit%u00e9 de %u00c9tica M%u00e9dica delHospital Universitario de Ja%u00e9n y del HospitalSanta Creu i Sant Pau de Barcelona. Losdonantes de sangre aceptaron participarmediante consentimiento informado porescrito.