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1.2. Las t%u00e9cnicas cl%u00e1sicas y biotecnol%u00f3gicasque fueron imprescindiblesEn el momento presente, con el fin de abordarun proyecto de este tipo, muy complejo ycostoso, es fundamental la colaboraci%u00f3n entredistintos centros y grupos de investigaci%u00f3n conel fin de lograr una sinergia tanto en ideas yconocimientos espec%u00edficos como eninfraestructura y medios en general. Estacolaboraci%u00f3n multidisciplinar ha permitidodisponer de las %u00faltimas y m%u00e1s novedosast%u00e9cnicas, muchas de ellas del %u00e1rea de labiotecnolog%u00eda.Se han utilizado t%u00e9cnicas cl%u00e1sicas mejoradascomo las propiamente dichas de obtenci%u00f3n demuestras, tanto de l%u00edquidos fisiol%u00f3gicos comosangre y orina, o a partir de procedimientosquir%u00fargicos como la obtenci%u00f3n de %u00f3rganos ytejidos. T%u00e9cnicas otras relacionadas con lapreservaci%u00f3n de las muestras en cadena de frioo fijaci%u00f3n celular, su procesamiento yfraccionamiento y su adecuaci%u00f3n a lasexigencias de las diversas t%u00e9cnicas deevaluaci%u00f3n. T%u00e9cnicas anal%u00edticas en el campo dela bioqu%u00edmica como las determinacionesenzim%u00e1ticas o de otros par%u00e1metrosbioqu%u00edmicos; tambi%u00e9n aquellas relacionadascon la Biolog%u00eda Molecular o de ADNrecombinante, como la obtenci%u00f3n de %u00e1cidosnucleicos, su purificaci%u00f3n y su amplificaci%u00f3nmediante la reacci%u00f3n en cadena de lapolimerasa, el estudio de expresi%u00f3n de ARNm,la subclonaci%u00f3n en pl%u00e1smidos, la purificaci%u00f3nde vectores virales, la preparaci%u00f3n de virusrecombinantes mediante el empaquetado defragmentos de ADN, o estudios de integraci%u00f3nviral en %u00f3rganos y tejidos. Tambi%u00e9n laprote%u00f3mica ha sido un campo de gran utilidadpara nuestros objetivos que nos han permitidoel estudio de prote%u00ednas en su estructuraprimaria, secundaria y terciaria.Por otro lado, los m%u00e9todos de cultivoscelulares nos han permitido llevar a caboestudios in vitro y la reducci%u00f3n del n%u00famero deanimales de experimentaci%u00f3n. Tambi%u00e9n paraevaluar los efectos tras la administraci%u00f3n deANALESRANFwww.analesranf.comtratamientos para este d%u00e9ficit de lacoagulaci%u00f3n, pero a cambio se recib%u00eda un altoreconocimiento y apoyo incondicional de lafamilia de Celia y de la sociedad que apoyabael proyecto.El %u00e9xito del proyecto por la altatransversalidad de los objetivos requer%u00edainevitablemente la colaboraci%u00f3n de distintosgrupos e instituciones de investigaci%u00f3n deforma multidisciplinar, como as%u00ed ha sido. M%u00e1starde y todo canalizado a trav%u00e9s de una jovenasociaci%u00f3n creada por los padres de lapaciente para este fin, la Asociaci%u00f3n para laInvestigaci%u00f3n y Cura del D%u00e9ficit de Factor V,Una Esperanza para Celia, con iniciativas demicro mecenazgo o financiaci%u00f3n colectiva(crowdfunding), as%u00ed como la financiaci%u00f3nrecibida de algunas empresas farmac%u00e9uticas yde la propia Universidad Complutense deMadrid con contratos predoctorales, se inici%u00f3el ambicioso proyecto de investigaci%u00f3n paralograr la %u201ccura%u201d del d%u00e9ficit de factor V.El objetivo general del proyecto eraestablecer protocolos de terapias avanzadas,g%u00e9nica o celular para el tratamiento de estapatolog%u00eda. De este objetivo general derivaronlos objetivos espec%u00edficos. As%u00ed, el primero deellos era establecer la causa mutacional deeste d%u00e9ficit cong%u00e9nito en el gen F5 de lapaciente y su segregaci%u00f3n parental; despu%u00e9scomo para cualquier otro tipo de enfermedadse precisaba contar con modelosexperimentales de patolog%u00eda tanto paraestudios in vitro en cultivos celulares (modelocelular) como en modelo animal vivo, quepresentara deficiencia de factor V y que sepudiera utilizar para estudios in vivo; eratambi%u00e9n necesario estandarizar las medidas dela actividad funcional de factor V en rat%u00f3n quehasta ese momento nada se hab%u00eda descrito, ypor %u00faltimo, como objetivo final, era demostrarla prueba de concepto de la utilidad de unaterapia g%u00e9nica, en nuestro caso con vectoreslentivirales, para la correcci%u00f3n del defectogen%u00e9tico en el gen F5.D%u00e9ficit de factor V y terapias avanzadasAntonio Liras et al. 19 An. R. Acad. Farm.Vol. 91. n%u00ba 1 (2025) %u00b7 pp. 17-44