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disuelto en la fase acuosa, mientras que el %u00e1cidodesoxirribonucleico (ADN) y las prote%u00ednaspermanecen en la fase org%u00e1nica y en la interfase.3.2.2. Purificaci%u00f3n del ARN.Cuantificaci%u00f3n, determinaci%u00f3n del grado depureza e integridad del ARN. Tratamientocon DNasa.El ARN aislado se purific%u00f3 utilizando un kit deInvitrogen, ThermoFisher (EEUU): Ribopure TM. Acontinuaci%u00f3n, el ARN obtenido se cuantific%u00f3 y seidentific%u00f3 su grado de pureza. Para lacuantificaci%u00f3n se utiliz%u00f3 un NanoDrop%u00ae One(ThermoFisher, EEUU) y se analizaron lossiguientes par%u00e1metros:%u2022 Relaci%u00f3n de absorbancias a 260 y 230nm(A260/230), que eval%u00faa una posiblecontaminaci%u00f3n con solventes org%u00e1nicos.%u2022 Relaci%u00f3n de absorbancias a 260 y 280nm(A260/280), que determina una posiblecontaminaci%u00f3n con prote%u00ednas.La relaci%u00f3n de las absorbancias en cuanto algrado de pureza de las muestras fue %u00f3ptima en elrango entre 1.8 y 2.0.Para determinar la integridad del ARN extra%u00eddose cargaron 500 nanogramos de ARN con tamp%u00f3nde carga y se realiz%u00f3 una electroforesis (90V, 20minutos) en gel de agarosa (2% p/v) al que sea%u00f1adi%u00f3 Midori Green Advance (Nippon Genetics).En el revelado del gel se observaron las bandascorrespondientes al ARN ribosomal (18S y 28S) (semuestran en la Figura A1 del anexo).Para asegurar la total eliminaci%u00f3n del posibleADN contaminante en la muestra y evitar suinterferencia en los posteriores an%u00e1lisis, se utiliz%u00f3el kit Turbo DNA-freeTM (Invitrogen, ThermoFisher,EE.UU.), el cual contiene DNasasmacho (Figura 4). La primera letra de cada grupoindica el tratamiento administrado a las madres,mientras que la segunda letra representa eltratamiento recibido por los descendientes.La recolecci%u00f3n de la sangre se realiz%u00f3 utilizandotubos Vacutainer%u00ae con EDTA-K2. Para obtener elplasma, las muestras de sangre fueron sometidasa centrifugaci%u00f3n (20 min, 3000 rpm, 4%u00baC), sedividieron en diferentes al%u00edcuotas y sealmacenaron a -80%u00baC hasta el momento de lamedici%u00f3n de los par%u00e1metros correspondientes. Porotro lado, los tejidos obtenidos fueron congeladosen nitr%u00f3geno l%u00edquido inmediatamente despu%u00e9s desu obtenci%u00f3n y se conservaron a -80%u00baC hasta elmomento de medir los par%u00e1metros deseados.3.2. Ensayos de par%u00e1metros moleculares3.2.1. Homogeneizaci%u00f3n de los tejidos yextracci%u00f3n del ARNPara la extracci%u00f3n de ARN, se tomaron 100mgde muestra a los cuales se les a%u00f1adi%u00f3 Tri Reagent%u00ae(Invitrogen, ThermoFisher, EEUU) y sehomogeneizaron utilizando un TissueLyser LT(Qiagen, EEUU). Tri Reagent es un reactivo quepermite lisar las c%u00e9lulas e inactivar las nucleasaspara prevenir la degradaci%u00f3n del %u00e1cidoribonucleico, gracias a que contiene fenol ytiocianato de guanidina.El homogenado obtenido se centrifug%u00f3 durante10 minutos, a 16000g y 4%u00baC. Por %u00faltimo, se llev%u00f3 acabo el aislamiento del ARN conbromocloropropano (BCP), que produce laformaci%u00f3n de una fase acuosa y otra org%u00e1nica. Secentrifugaron de nuevo las muestras en las mismascondiciones, lo que permiti%u00f3 extraer el ARN182ANALESRANFwww.analesranf.comNutrigenomiceffectsoffructosealoneorassociatedwithcholesterolor salt on thyroid hormone function. Influence of maternal intakeCarlaMarcuccini,ElenaFausteetal.An. R.Acad. Farm.Vol. 90. n%u00ba 2 (2024) %u00b7 pp. 175-196Figura 4. Dise%u00f1o experimental. Creada con BioRender.com