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Enzymatic synthesis of fructooligosaccharides that stimulate the gut microbiota

tres bandas correspondían a secuencias de levansacarasa presenta la preparación enzimática de Amano® se puede
por lo que se deduce que pueden ser isoformas de la atribuir a la enzima levansacarasa de Z. mobilis.
misma. Con esto se concluye que toda la actividad que

Figura 4. Temperatura y pH óptimos. A. Estabilidad (círculos negros) expresada como actividad residual tras 24 h de incubación y
temperatura óptima (círculos blancos) en U/mg de preparado comercial. B. Estabilidad (círculos negros) expresada como actividad
residual tras 1 h de reacción y pH óptimo (círculos blancos) en U/mg de preparado comercial.

Figura 5. SDS-PAGE y actividad en gel (zimograma). A. SDS-PAGE. Carril 1: marcadores de peso molecular. Carril 2: LEV. Carril 3:
TG. Carril 4: LEV + 10 U/ml TG. Carril 5: LEV + 20 U/ml TG. Carril 6: LEV + 40 U/ml TG. B. Zimograma. Carril 1: LEV. Carril 2:
LEV + 10 U/ml TG. Carril 3: LEV + 20 U/ml TG. Carril 4: LEV + 40 U/ml TG.

3.2. Producción de fructooligosacáridos por la disponíamos de estándares. El pico 13 se purificó por
levansacarasa soluble HPLC semipreparativa y se envió a un servicio externo
para la identificación por masas y RMN. Los resultados de
Se analizó una reacción con sacarosa 600 g/l y 5 U/ml espectrometría de masas mostraron que el pico 13 era un
de LEV soluble en tampón acetato 50 mM pH 5.6. Con la tetrasacárido (MW = 666 g/mol). Finalmente los
ayuda de estándares se identificaron los oligosacáridos 1- resultados de RMN confirmaron que se trataba de la 66-
kestosa 6-kestosa blastosa neokestosa y nistosa mediante nistosa.
HPAEC-PAD con la columna CarboPack PA1 (Figura
6A). Se formaban también otros productos para los que no

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