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Estudio
de
la
actividad
neuroprotectora
de
diterpenos…

2.2.
Líneas
celulares

2.2.1.
Líneas
celulares
utilizadas
en
los
estudios
de
estrés
oxidativo
y

disfunción
mitocondrial.
Tratamiento
celular.

Línea
celular
PC12
(Neuronas)

La
línea
celular
PC12
se
adquirió
de
la
colección
de
cepas
American
Type

Culture
Collection
(ATCC).
El
medio
de
cultivo
utilizado
es
Dulbecco’s
Modified

Eagle’s
Medium
(DMEM)
(Gibco,
Invitrogen
Corporation)
suplementado
con
0,5%

de
gentamicina
(Gibco,
Invitrogen
Corporation)
y
0,2%
de
piruvato
(Sigma-­-
Aldrich).
Las
células
se
mantienen
a
37ºC
en
atmósfera
de
aire
al
95%
y
de
CO2
al

5%.

Línea
celular
U373-­-MG
(Astrocitos)

La
línea
celular
U373-­-MG
se
adquirió
desde
Sigma-­-Aldrich
procedente
de
la

Colección
Europea
de
Cultivos
Celulares
Animales
(ECACC).
El
medio
de
cultivo

empleado
es
Dulbecco’sModifiedEagle’s
Medium
(DMEM)
(Gibco,
Invitrogen

Corporation)
suplementado
con
0,5%
de
gentamicina
(Gibco,
Invitrogen

Corporation)
y
suero
fetal
bovino
(FBS)
(Gibco,
Invitrogen
Corporation).Las
células

se
mantienen
en
condiciones
de
temperatura
y
atmósfera
húmeda
de
37ºC,
95%
de

aire
y
5%
de
CO2.

Tratamiento
celular

Las
células
U373-­-MG
y
PC12
se
tratan
con
los
diterpenos
objeto
de
estudio

(diferentes
concentraciones
según
el
propio
desarrollo
de
la
Tesis)
durante
24
h,
y

posteriormente
con
H2O2
(1
mM
para
las
células
U373-­-MG
y
0,1
mM
para
las

células
PC12)
durante
30
minutos.

2.2.2.
Líneas
celulares
utilizadas
en
los
estudios
de
paso
a
través
de
Barrera

Hemato
Encefálica
(BHE)

Línea
celular
RBE4

Las
células
RBE4
fueron
cedidas
por
el
Dr.
Pierre
Olivier
Couraud
del

Instituto
Cochin
del
Instituto
Nacional
de
la
Salud
y
de
la
Investigación
Médica

(INSERM)
de
París
(Francia).Las
células
RBE4
crecen
en
frascos
de
cultivo

tapizados
durante
al
menos
3
horas
con
3
mL
de
una
solución
de
colágeno

obtenida
a
partir
del
tendón
de
cola
de
rata.
Las
células
se
mantienen
en
una

atmósfera
de
95%
de
aire
y
5%
de
CO2,
saturada
de
humedad
a
37ºC.
El
medio
de

cultivo
empleado
es
Hams
F-­-10/a-­-Minimum
Essential
Medium
(a-­-MEM)
(1:1)

(Gibco,
Invitrogen
Corporation),
suplementado
con
Glutamax
(Sigma-­-Aldrich),

10%
de
suero
fetal
de
ternero
(Gibco,
Invitrogen
Corporation),
geneticina
(300

µg/mL)
(Sigma-­-Aldrich)
y
factor
básico
de
crecimiento
de
fibroblastos
(bFGF,
1

ng/mL)
(Boehringer).

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