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YANETSY
MACHADO
TUGORES
&
col

El
cultivo
se
ajusta
a
70.000
macrófagos
en
100
µl/pocillo.
Después
de
24
h

de
incubación

a
37
°C
con
5
%
de
CO2,
se
retira
el
medio
y
se
añaden
200
µl
de
los

productos
a
evaluar
previamente
disueltos.
Por
cada
concentración
de
los

productos
se
utiliza
un
pocillo
sin
macrófagos.

También
se
utilizan
controles
de
dimetilsulfóxido
al
0,2
%
y
de
crecimiento

de
células.
Tras
24
h
en
contacto
con
los
productos
se
retira
el
medio
y
se
añaden

100

µl/pocillo
de
MTT
(0,4
mg/ml)
en
PBS,
incubándose
a
37
°C/1
h.
Los
cristales

de
formazán
se
disuelven
con
100
µl/pocillo
de
dimetilsulfóxido.
Se
leen
las

absorbancias
a
595
nm
y
la
actividad
citotóxica
se
calcula
empleando
la
formula:

%C=100-­-[(A
fármaco-­-A
blanco)/A
control-­-A
blanco)]*100

Donde:
%C
=
porcentaje
de
citotoxicidad
inespecífica

A=
absorbancia.

2.2.4.
Test
de
inhibición
de
la
biomineralización
de
la
ferroprotoporfirina
IX

(FBIT)

En
Plasmodium
spp.,
la
eliminación
de
la
ferroprotoporfirina
IX
(FPIX)

durante
el
proceso
de
degradación
de
la
hemoglobina,
es
un
mecanismo

indispensable
para
la
supervivencia
del
parásito
por
lo
que
un
fármaco
capaz
de

inhibir
la
polimerización
de
la
FPIX,
podría
ser
letal
para
el
parásito
(42).

En
una
placa
de
96
pocillos
no
estéril
se
colocó
50
µl
de
solución
de

clorhidrato
de
hemina
bovina
en
DMSO
por
pocillo
a
una
concentración
de
0.5

mg/ml,
100
µl
de
buffer
acetato
de
sodio
pH
4.4
por
pocillo
y
50
µl
de
cada
uno
de

los
compuestos
en
estudio
disueltos
en
DMSO.
Se
utilizaron
como
controles
50
µl

de
DMSO
y
50
µl
de
cloroquina
difosfato
(CQ).

Para
cada
concentración
se
colocaron
3
replicas,
así
como
para
los

controles.
Las
placas
se
incubaron
a
37
°C
por
18-­-24
horas
y
luego
se
centrifugaron

a
3000
rpm
durante
5
minutos
eliminando
el
sobrenadante.

A
continuación,
se
añadió
150
µl
de
DMSO
en
cada
pocillo
y
se
centrifugó

nuevamente
la
placa
a
3000
rpm
durante
5
minutos,
eliminándose
de
nuevo
el

sobrenadante.

Posteriormente
se
colocaron
150
µl
de
hidróxido
de
sodio
0,1
N
por
pocillo,

realizándose

la
lectura
de
la
absorbancia
a
una
longitud
de
onda
de
405
nm
en
un

lector
ELISA
(42).

El
porcentaje
de
inhibición
de
cada
producto
de
síntesis
fue
calculado

mediante
la
siguiente
fórmula:

468