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M. A. MOSSO Y COLS. AN. R. ACAD. NAC. FARM.
Microorganismos totales y vivos
El recuento de microorganismos totales y vivos se ha realizado
por la técnica de fluorescencia. Las muestras de agua se tiñeron
durante 15 minutos con el «kit» de viabilidad bacteriana «BacLight
Live/Dead» (Molecular Probes, Eugene, OR, USA), compuesto de dos
colorantes con afinidad a los ácidos nucleicos, SYTO 9 y yoduro de
propidio. El SYTO 9 colorea todas las células de verde y el yoduro
de propidio penetra en las células que tengan dañada su membrana,
tiñéndolas de rojo (3). Después de teñir la muestra se filtró a través
de un filtro Nucleopore de 0,2 µm y se observó con objetivo de
inmersión en un microscopio de epifluorescencía (Nikon). Seguida-
mente se cuantificó el número de células verdes (vivas) y rojas (muer-
tas) presentes, en al menos 10 campos del microscopio, y se calculó
el número de microorganismos totales y vivos por mililitro de mues-
tra (4).
Bacterias heterótrofas aerobias viables y esporuladas
El recuento de bacterias viables se ha realizado por dos técnicas:
filtración y dilución en placa, en los medios, agar recuento en placa
(PCA) (5) y agar R2A (6). La incubación se ha realizado a 22° C
durante 5 días y a 37° C durante dos días. Para el recuento de
bacterias esporuladas se calentó la muestra a 80ºC, 10 min, sem-
brando por las mismas técnicas y medios descritos anteriormente,
adicionados con 0,1% de almidón e incubando a las mismas tempe-
raturas. Los resultados se expresaron como medias aritméticas de
las unidades formadoras de colonias por mililitro (ufc/mL) de agua.
Microorganismos de interés sanitario
Se han utilizado los métodos oficiales de las aguas de bebida
envasadas (7). Los recuentos de coliformes totales, coliformes feca-
les y enterococos, se han realizado por las técnicas del número más
probable (NMP/100 mL) y de filtración, filtrando 100 mL de agua.
Las esporas de Clostridium sulfito-reductores y C. perfringens se han
determinado por el método de dilución en tubo, inoculando 100 mL
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