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CRISTINA HERVÁS Y COLS. AN. R. ACAD. NAC. FARM.

diphosphate, UDP. The PCR analysis show the presence of P2Y6 messenger RNA,
increasing with the days in culture. Single cell microfluorimetric studies show
citosolic calcium increase in response to UDP, this being more significant at the
soma level. The cytosolic calcium increase triggers cellular responses mediated by
calcium dependent enzymes. This is the case for calcium-calmodulin kinase II,
CaMKII, which is extensively distributed through the granule neuron, according
the immunocytochemical studies. This enzyme once activated is able to auto-
phosphorylate and by using antibodies against the phosphorylated form the active
zones can be detected. After UDP stimulation, the location of the phosphorylated
form of CaMKII appears to be mainly at the neural soma, with lower presence at
the axodendritic prolongations, which correlates with the functional P2Y6 subtype
receptor distribution.

Key words: Granule neurons.—Cerebellum.—Nucleotide receptors.—P2Y
receptors.—Purinergic.—CaMKII.—Calcium signaling.

En el Sistema Nervioso Central (SNC) de los vertebrados se en-
cuentra el cerebelo que tiene una estructura relativamente sencilla y
repetitiva, lo que permite identificar con cierta facilidad sus tipos
celulares. La corteza cerebelosa se divide en tres capas, la más ex-
terna o molecular, la intermedia donde están los somas de las neu-
ronas de Purkinje, y la granular donde están las células denomina-
das granulares, por su pequeño tamaño y la forma redondeada de su
soma. En los mamíferos el cerebelo es inmaduro al nacer, lo que
permite realizar cultivos primarios de sus neuronas (Mateo y col.,
1998). En la rata las neuronas granulares se pueden obtener antes de
los 7 días de edad y una vez en cultivo se diferencian y adquieren
morfologías complejas. En trabajos previos del grupo hemos carac-
terizado estos cultivos y demostrado la naturaleza glutamatérgica de
las neuronas granulares mediante inmunohistoquímica. La presen-
cia del transportador de glutamato, VGLUT1, que es un marcador de
vesículas de secreción neural identifica las neuronas con fenotipo
glutamatérgico (Hervás y col., 2003).

Las neuronas granulares en cultivo se pueden emplear para estu-
dios de diferenciación, expresión de diversas proteínas, como recep-
tores, etc., y para respuestas funcionales en poblaciones o en células
individuales. Es de destacar que son un valioso utensilio para el
ensayo de compuestos con potencialidad farmacológica en el siste-
ma nervioso, y proporcionan la posibilidad de estudiar los efectos en

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