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M. PEREA FALOMIR Y COLS. ANAL. REAL ACAD. FARM.
“Con objeto de mejorar los métodos de análisis con respecto a la
sensibilidad y precisión, es necesario considerar algunas características
generales de los procedimientos analíticos que optimizan estas cualidades.
La mayor parte de las técnicas incluyen la conversión de la sustancia
problema en un producto que pueda ser observado directamente. Para la
máxima sensibilidad se requieren dos condiciones. En primer lugar, una
máxima conversión molar de problema en producto (la sensibilidad puede
aumentarse por procedimientos cíclicos que den como resultado la
conversión de una molécula de problema en varias moléculas de
producto). En segundo lugar, la propiedad ensayada debe ser detectable
con gran sensibilidad. Considerado a la luz de otros procedimientos
analíticos, el radioinmunoanálisis es muy peculiar, ya que proporciona un
método indirecto de medida del analito, convirtiéndolo, parcialmente en
un complejo antígeno-anticuerpo. La cantidad de este complejo es
estimada indirectamente por su efecto en reducir la cantidad de complejo
formado entre el antígeno marcado, y el anticuerpo. Este procedimiento
presenta algunas desventajas teóricas y prácticas:
1. Las hormonas polipeptídicas marcadas han de ser alteradas más
o menos severamente
para introducir el trazador.
2. Una proporción variable, y a menudo grande, del problema
queda sin reaccionar, lo cual reduce la sensibilidad.
3. Para obtener competición entre hormona marcada y no marcada
en radioinmunoanálisis, la concentración de anticuerpo es reducida
hasta que es solamente suficiente para unir, en ausencia de hormona no
marcada, aproximadamente la mitad de la hormona marcada presente.
Esto tiene dos importantes implicaciones:
Los cambios en la hormona no marcada se observan frente a un
alto fondo de radiactividad.
La concentración de anticuerpo debe ser reducida a un nivel
inferior a la del antígeno. Por lo tanto, a no ser que el anticuerpo tenga
una muy alta afinidad, el equilibrio de la reacción antígeno-anticuerpo
impedirá que se alcance una sensibilidad grande.
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