Page 9 - 82_01

ANALES?DE?LA?REAL?ACADEMIA?NACIONAL?DE?FARMACIA? Short Communications

ISSN (Online) 1697-4298 analesranf.com

Enrichment-improvement in the effectiveness of the implementation of
the polymerase chain reaction of pathogens in food

Title in Spanish: Enriquecimiento-mejora en la eficacia de la realización de la reacción en cadena de la
polimerasa de patógenos en alimentos

J. Cuadrado1*, C. Cuadrado2, B. Cuadrado3

1Laboratorio de Salud Pública de Jaén. Junta de Andalucía. Paseo de la Estación 21, 1ª Planta, 23008, Jaén, España.
2Facultad de Ciencias Experimentales. Universidad de Jaén, Campus Las Lagunillas 23009, Jaén, España. 3Facultad de
Farmacia. Universidad de Granada, Campus Universitario de Cartuja 18071, Granada, España.

ABSTRACT: Objective. Improve the effectiveness of RESUMEN: Objetivo. Mejorar la eficacia de los

the tests by qualitative polymerase chain reaction (PCR) ensayos cualitativos por reacción en cadena de la
of pathogens in food. When performing a enrichment polimerasa (PCR) de patógenos en alimentos. Al

consists in making a lower dilution to the 1/10 is intends realizar un enriquecimiento consistente en hacer una
to bring forward in time, reduce the cost of media, it dilución inferior a la 1/10 se pretende adelantar en
seeks to enable the complete up to 100% of the samples tiempo, reducir el gasto de medios, se procura posibilitar

to perform in a PCR and does not decrease the load cell el completar hasta el 100% las muestras a realizar en
Diana of the food. Methods. Investigation of the una PCR y no disminuir la carga celular diana del
presence or absence of a pathogenic bacterium in food alimento. Métodos. Investigación de la presencia o

and its concentration per millilitre of dissolution, ausencia de una bacteria patógena en un alimento y su
following the traditional method in different dilutions, in concentración por mililitro de disolución, siguiendo el
two different types of food. Results. The results método tradicional a distintas diluciones, en dos

obtained in the experiment with a pathogen in food, matrices. Resultados. Los resultados obtenidos en el
evidence that using dilutions lower than 1/10, the experimento con un patógeno en alimentos, evidencia
bacterial concentration for a minimum number of hours que con diluciones inferiores a 1/10, la concentración
of incubation anticipates the detection by PCR of bacteriana para un mínimo de horas de incubación

deoxyribonucleic acid (DNA) target, with values of adelanta la detección por PCR del ácido
cfu/ml above 1x103. Therefore the incubation time in an desoxirribonucleico (ADN) diana, con valores de ufc/ml
enrichment broth and the volumes of the solutions are por encima de 1x103. Por tanto el tiempo de incubación

reduced. And it is only needed one operator and one en un caldo de enriquecimiento se acorta, así como los
incubator for all tasks. Conclusions. The efficacy volúmenes de las disoluciones a incubar. Y de este
increases because are needed less material and working modo solo es necesario un operario y una estufa de

hours. Testing more samples in the same working day incubación para realizar todas las tareas. Conclusiones.
(makes possible to perform all samples that supports the Mayor eficacia al necesitarse menos medios materiales y
thermal cycler for each start-up) the analysis time horas de trabajo. Realización de mayor número de

decreases in seven hours at least. muestras en una misma jornada de trabajo (se posibilita
realizar el total de muestras que admite el termociclador
por cada puesta en funcionamiento), se acorta el tiempo

de análisis en siete horas como mínimo.

*Corresponding Author: jose.cuadrado@juntadeandalucia.es An Real Acad Farm Vol. 82, Nº 1 (2016), pp. 9-13
Received: January 6, 2015 Accepted: January 25, 2016 Language of Manuscript: Spanish

1. INTRODUCCIÓN sería de cuatro días para una muestra con presencia y siete
días para una con ausencia (en el mejor de los casos para
Desde la aparición de la técnica por PCR, cada vez son ambas), con la técnica PCR para la misma determinación,
más numerosos los técnicos y/o gerentes que implantan el tiempo no excedería de dos días (1).
dichos métodos en sus laboratorios, (demostrado por el
aumento de participaciones en ensayos intercomparativos A la hora de realizar un ensayo de PCR para la
con estas técnicas y en el número de artículos que determinación de patógenos en alimentos suele estar
desarrollan esta metodología). Una de las principales indicado el enriquecimiento de la muestra (2,5).
ventajas de las técnicas moleculares es la reducción del
tiempo de análisis, pudiendo ser de días en algunas ¿Qué importancia tiene en una investigación (por
determinaciones, por ejemplo, con un método tradicional ejemplo para la determinación de Salmonella spp), la
de investigación de Listeria monocytogenes según UNE cantidad exacta de diluyente añadido (225 ml de agua de
EN ISO 11290-1:1997/A1: 2005, la duración del ensayo peptona tamponada (BPW) para 25 g de muestra) a la hora
de detectar todas las posibles bacterias diana existentes en

@Real Academia Nacional de Farmacia. Spain 9