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  Estandarización	
  de	
  un	
  modelo	
  murino…	
  

	
  
hemoglobina	
  y	
  el	
  tipo	
  de	
  progresión	
  e	
  infección	
  que	
  cursa	
  el	
  ratón.	
  Así,	
  los	
  ratones	
  
del	
   grupo	
   con	
   EMC	
   presentaron	
   valores	
   de	
   hemoglobina	
   (Hb)	
   prácticamente	
  
constantes	
  durante	
  el	
  proceso	
  infectivo	
  (Figura	
  3C1),	
  mientras	
  que	
  en	
  aquellos	
  que	
  
no	
   desarrollaron	
   la	
   infección	
   cerebral,	
   PLAP	
   y	
   PRAP,	
   (Figura	
   3C2	
   y	
   C3)	
   la	
  
concentración	
   de	
   Hb	
   disminuyó	
   al	
   50%	
   en	
   la	
   primera	
   semana	
   p.i.,	
   debido,	
  
posiblemente,	
   a	
   la	
   anemia	
   que	
   sufren	
   como	
   consecuencia	
   de	
   la	
   hiperparasitemia	
  
que	
  alcanzan	
  estos	
  dos	
  grupos.	
  

3.3.	
  Permeabilidad	
  de	
  la	
  barrera	
  hematoencefálica	
  (prueba	
  del	
  Evan’s	
  Blue)	
  	
  
        	
   El	
   cambio	
   de	
   la	
   permeabilidad	
   de	
   la	
   BHE	
   secundario	
   al	
   secuestro	
   de	
   la	
  

microvasculatura	
   	
   (18,	
   36,	
   37)	
   explica	
   el	
   edema	
   cerebral	
   que	
   frecuentemente	
  
acompaña	
   a	
   la	
   malaria	
   cerebral.	
   Con	
   el	
   fin	
   de	
   evaluar	
   si	
   las	
   anormalidades	
   en	
   la	
  
BHE	
  se	
  asocian	
  a	
  la	
  evolución	
  clínica	
  de	
  la	
  patología	
  cerebral	
  procedimos	
  a	
  valorar	
  
la	
  integridad	
  de	
  la	
  misma	
  en	
  el	
  modelo	
  murino	
  clasificado	
  por	
  estadios,	
  utilizando	
  
el	
  test	
  de	
  coloración	
  con	
  la	
  solución	
  de	
  “Evan’s	
  Blue”.	
  Como	
  se	
  muestra	
  en	
  la	
  figura	
  
4A,	
   el	
   tejido	
   cerebral	
   extraído	
   de	
   los	
   ratones	
   del	
   grupo	
   MC	
   adquirió	
   la	
   coloración	
  
azul	
   propia	
   de	
   la	
   tinción	
   utilizada	
   indicativa	
   del	
   daño	
   en	
   la	
   función	
   de	
   la	
   barrera	
  
hematoencefálica.	
   La	
   alteración	
   en	
   la	
   BHE	
   aumentó	
   a	
   medida	
   que	
   progresaba	
   la	
  
patología	
   cerebral.	
   En	
   la	
   figura	
   4	
   se	
   observa	
   que,	
   en	
   el	
   primer	
   estadio,	
  
asintomático,	
   la	
   BHE	
   está	
   aún	
   funcional,	
   siendo	
   impermeable	
   a	
   la	
   entrada	
   de	
   la	
  
solución	
   de	
   tinción,	
   pero	
   dicha	
   permeabilidad	
   cambia	
   según	
   progresa	
   el	
   cuadro	
  
clínico	
  neurológico,	
  detectándose	
  ya	
  en	
  el	
  estadio	
  II	
  entrada	
  del	
  colorante	
  al	
  tejido	
  
cerebral,	
  lo	
  que	
  se	
  relaciona	
  con	
  el	
  inicio	
  de	
  los	
  síntomas	
  de	
  la	
  MC.	
  La	
  ruptura	
  más	
  
severa	
  en	
  la	
  BHE	
  se	
  detectó	
  en	
  el	
  estadio	
  IV,	
  donde	
  el	
  cerebro	
  adquirió	
  una	
  intensa	
  
coloración	
   azul,	
   siendo	
   ese	
   momento	
   cuando	
   los	
   animales	
   manifestaron	
   los	
  
síntomas	
   más	
   graves	
   de	
   MC	
   como	
   convulsiones	
   o	
   el	
   coma.	
   En	
   la	
   misma	
   figura	
   se	
  
muestran	
   cuatro	
   cerebros	
   que	
   fueron	
   extraídos	
   de	
   los	
   animales	
   pertenecientes	
   a	
  
los	
  otros	
  dos	
  grupos	
  de	
  infección	
  caracterizados,	
  dos	
  del	
  grupo	
  PLAP	
  (Figura	
  4C)	
  y	
  
dos	
   del	
   grupo	
   PRAP	
   (Figura	
   4B),	
   y	
   tratados	
   de	
   la	
   misma	
   forma	
   con	
   la	
   solución	
   de	
  
Evan’s	
   Blue.	
   Como	
   se	
   puede	
   observar	
   en	
   las	
   imágenes,	
   en	
   ninguno	
   de	
   estos	
   casos	
  
aparecen	
   evidencias	
   de	
   ruptura	
   de	
   la	
   BHE,	
   ya	
   que	
   no	
   hay	
   acumulación	
   de	
  
coloración	
  azul	
  en	
  el	
  parénquima	
  cerebral,	
  comportándose	
  igual	
  que	
  la	
  muestra	
  del	
  
control	
   sano.	
   El	
   cerebro	
   de	
   los	
   animales	
   del	
   grupo	
   PLAP,	
   fue	
   extraído	
   entre	
   el	
   día	
  
10	
   y	
   12	
   p.i.,	
   y	
   en	
   el	
   grupo	
   PLAP	
   las	
   muestras	
   se	
   tomaron	
   en	
   el	
   día	
   6	
   p.i.,	
   cuando	
  
presentaban	
   altos	
   niveles	
   de	
   parasitemia,	
   síntomas	
   de	
   decaimiento	
   general	
   y	
  
anemia	
  severa.	
  	
  

                                                                                                                            	
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