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VOL. 74 (2), 229-256, 2008 DISEÑO Y DESARROLLO DE NUEVAS...

nas, correspondientes al pDNA obtenido tras la ruptura de los com-
plejos preparados con PAMAM G4 (columnas 3-8) y PAMAM G5 (co-
lumnas 9-14) incubados 30 minutos en presencia de DNAsa, el pDNA
está totalmente protegido independientemente de la relación de car-
ga o de la generación.

7. Evaluación in vitro en cultivos celulares

Para la evaluación in vitro de las formulaciones galénicas se rea-
lizaron estudios de eficacia de transfección y de toxicidad en las
líneas celulares HepG2 (células de hepatocarcinoma humano) y CT26
(células de cáncer de colon de ratón).

7.1. Eficacia de transfección

Los resultados de la eficacia de transfección in vitro aparecen re-
cogidos en la Figura 5. Las células fueron transfectadas con los com-
plejos preparados con las generaciones 4 y 5 del polímero a distintas
relaciones de carga. También se transfectaron con DNA desnudo (con-
trol) para poder evaluar las diferencias en la expresión génica entre el
DNA libre y el condensado. Se observó que el DNA desnudo presenta-
ba una eficacia de transfección prácticamente nula.

Los complejos PAMAM G5/DNA presentan eficacias de transfec-
ción 5 y 30 veces superiores a los formulados con PAMAM G4 en
HepG2 y CT26, respectivamente. Además, si analizamos los valores de
transfección dentro de una misma generación, observamos que en
ambos casos la expresión de luciferasa aumenta con la relación de
carga hasta alcanzar su máximo nivel a 10/1. En este punto máximo,
los complejos preparados con las generaciones 4 y 5 presentan una
eficacia de transfección 50 y 250 veces superior respecto al DNA solo,
respectivamente en la línea celular HepG2 (Figura 5A). En las célu-
las CT26, el incremento respecto al control fue 7 y 225 veces mayor
para los complejos de PAMAM G4 y G5, respectivamente (Figura 5B).
En la Figura 6 se muestran las eficacias de transfección de los com-
plejos en presencia o ausencia de suero. Los resultados indican que
los valores de expresión en presencia de suero fueron superiores en
todos los casos.

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