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ANALES de tensioactivos. Estudiaron separada y comparativamente una
RANF serie de métodos distintos, y variaron el tamaño de la molécula
atrapada, la naturaleza del tensioactivo, la composición de las bi-
www.analesranf.com capas y la ultrasonación de los liposomas. Para comparar diferentes
resultados, se definió un parámetro, R50, como la relación molar
dos, el potencial de superficie, los iones calcio, EDTA o la albúmina. fosfolípido / tensioactivo que produce una liberación del 50 % del
La presencia de colesterol hacía que las vesículas fueran más sus- soluto atrapado (Fig. 15). Este parámetro parecía ser, en gran me-
ceptibles al crecimiento inducido por el detergente. Las concentra- dida, independiente de la concentración de liposomas. La liberación
ciones más altas de detergente causaban finalmente la del contenido de liposomas inducida por tensioactivos no ocurría
solubilización de los liposomas. Estos estudios fueron continuados como resultado de la destrucción/solubilización de las bicapas de
años más tarde por Urbaneja y cols. [94], que observaron cómo la fosfolípidos, sino que era un fenómeno diferente, que ocurría a con-
solubilización de las vesículas pequeñas unilamelares comenzaba centraciones de detergente sustancialmente más bajas (2-5 veces)
a bajas concentraciones de detergente, en comparación con el caso que la solubilización. La cantidad requerida de tensioactivo parecía
de vesículas grandes multilamelares, y se acompañaba de la rápida aumentar con el tamaño del soluto atrapado. El R50 dependía cla-
formación simultánea de grandes liposomas multilamelares. Las ramente de la naturaleza del anfífilo soluble, pero no existía una
mediciones de la distribución de lípidos y detergente indicaban que, relación obvia con su concentración micelar crítica. La liberación del
para una relación molar de lípido:detergente de 1:1, aproximada- contenido de vesículas también dependía de la composición de la
mente un tercio del lípido, con la mayor parte del detergente, se bicapa: los fosfolípidos tenían diferentes efectos sobre la estabilidad
solubilizaba en forma de micelas mixtas. Los dos tercios restantes de la membrana, según sus cabezas polares. El colesterol era inte-
se encontraban en forma de liposomas multilamelares, práctica- resante, ya que en proporciones equimolares con fosfatidilcolina,
mente libres de detergente. Se consideró que estos resultados po- disminuía la estabilidad de la bicapa frente al Triton X-100, mien-
dían tener implicaciones con respecto a la fusión de membranas, tras que la aumentaba en presencia de colato. La ultrasonación
así como a la reconstitución de proteínas de membrana en presencia también ejercía una influencia sobre la liberación del contenido de
de detergentes. Estas ideas encontraron más tarde su confirmación vesículas dependiente del tensioactivo; parecía disminuir la esta-
en los modelos de fusión de membranas propuestos en los años 90 bilidad de la bicapa, por lo que se requerían concentraciones más
y siguientes [144]. Se demostró además que los surfactantes po- bajas de detergente para liberar los solutos atrapados.
tenciaban el papel del polietilenglicol utilizado experimentalmente
para inducir fusión de células [145]. La liberación del contenido acuoso de las vesículas no es
el único fenómeno producido por los detergentes a concentraciones
4.4.b. Permeabilización de membranas y liberación sublíticas de la membrana. Ahyayauch y cols. [56] estudiaron por
del contenido vesicular diversas técnicas los principales efectos de los detergentes a concen-
traciones subsolubilizantes sobre las membranas, a saber, el movi-
La presencia de detergentes, incluso en concentraciones miento lipídico transmembrana (flip-flop), la ruptura de la barrera
muy inferiores a las requeridas para observar cualquier aumento de permeabilidad de la membrana (liberación de contenidos) y la
en el tamaño de las vesículas, favorece la liberación de su contenido
[80, 81]. Esta observación, original en su día, ha recibido abundante
confirmación experimental más tarde, en liposomas y en eritrocitos
[30, 56]. Así, Ruiz y cols. [30] afrontaron un enfoque sistemático
del fenómeno de la liberación de contenido liposómico dependiente
Figura 15. Utilización de la 6-carboxifluoresceína para detectar la permeabilización de liposomas inducida por detergente. (A) Porcentaje de auto-atenuación de la
fluorescencia de la 6- carboxifluoresceína, originalmente encapsulada en liposomas, en función de la concentración de Triton X-100. (B) Círculos negros, porcentaje de liberación
de 6-carboxifluoresceína; círculos blancos, porcentaje de fosfolípido solubilizado. Las líneas de puntos indican el procedimiento para calcular el parámetro R50.
Detergentes: de los principios físicos a las aplicaciones 83
biofarmacéuticas (o por qué prevenimos la covid-19 con agua y jabón)
Félix M. Goñi y Alicia Alonso
An. Real Acad. Farm. Vol. 87. Nº1 (2021) · pp. 53 - 96
