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ANALES X-100. Estos efectos podrían deberse a una solubilización selectiva
RANF de las subunidades reguladoras o catalíticas, o a un cambio confor-
macional del complejo enzima-detergente. Más tarde, utilizando
www.analesranf.com partículas submitocondriales de corazón de buey, Goñi y cols. [135]
observaron que los efectos del Triton X-100 a concentraciones sub-
de la bicapa lipídica. Cuando se centrifugaron suspensiones mito- solubilizantes cambiaban según el estado fisiológico de las partí-
condriales tratadas con detergente para separar el material solu- culas: acopladas (funcionales), desacopladas (cadena
bilizado del material particulado, sólo las tres primeras actividades transportadora de electrones y ATPasa activas, pero incapaces de
enzimáticas mencionadas anteriormente se encontraban en los so- producir ATP), e inhibidas con azida (cadena transportadora de
brenadantes. Después de la centrifugación, se manifiestó una acti- electrones inactivada). Esto apoyaba la idea, entonces aún debatida,
vidad latente de ubiquinol: citocromo c oxidasa, mientras que el de que la síntesis de ATP en la fosforilación oxidativa pasaba por
mismo proceso de centrifugación produjo la inhibición de la cito- cambios conformacionales en la mitocondria.
cromo c oxidasa en presencia de ciertas concentraciones de Triton
4.2. VESÍCULAS DE RETÍCULO SARCOPLÁSMICO
Figura 12. Micrografías electrónicas de cortes finos de pellets obtenidos por cen- Las células musculares tienen un retículo endoplásmico
trifugación de membranas internas mitocondriales tratadas con Triton X-100.
Concentraciones de detergente: (A) 0%, (B) 0,05%, (c) 0,10%. Las vesículas de especializado en el almacenamiento/liberación de calcio en la con-
membrana interna (A), sufren lisis y reensamblaje, dando lugar a vesículas mul- tracción muscular, que se conoce como retículo sarcoplásmico (RS).
tilamelares (B), y posteriormente, a bicapas planas apiladas (C). Aumentos: A, El RS se aísla con facilidad a partir de músculo, y es muy rico en la
20.000, B, 33.000; C, 42.000 [133]. llamada bomba de calcio, o ATPasa dependiente de Ca2+ (RS AT-
Pasa, o Ca2+- ATPasa) que se purifica con detergentes con relativa
facilidad [136]. Las vesículas de RS han sido muy utilizadas en es-
tudios de solubilización de membranas por detergentes.
En nuestro laboratorio, Villalain y cols. [137] estudiaron
comparativamente los efectos producidos por los detergentes Triton
X-100, dodecilsulfato de sodio (SDS) y colato de sodio sobre las ve-
sículas del RS. En todos los casos, los efectos máximos se encontraron
ya 5 min después de la adición de detergente. Triton X-100 y SDS
eran aproximadamente diez veces más eficaces que el colato en la
solubilización de proteínas y fosfolípidos. Tanto el Triton X-100 como
el SDS mantenían la acumulación de Ca2+ en vesículas de SR a con-
centraciones de detergente por debajo de 10-3 M; concentraciones
más altas provocaban sin embargo una fuerte inhibición. Por otro
lado, el colato producía una inhibición gradual de la acumulación
de Ca2+ en el rango de concentración entre 10-4 M y 2.5 • 10-2 M.
El Triton X-100 y el SDS causaban una solubilización gradual de la
actividad específica de la CaCa2+-ATPasa hasta una concentración
de detergente 10-3 M, por encima de la cual se producía una fuerte
inactivación, mientras que la solubilización de la enzima aumentaba
con la presencia de colato en todo el rango de concentración en es-
tudio. El estudio sugería que el comportamiento diferente del colato
de sodio, en comparación con SDS o Triton X-100, estaba relacio-
nado con las estructuras moleculares de los tensioactivos, rígida
plana en el caso del colato, y lineal flexible en los otros dos casos.
Estos estudios fueron continuados por Prado y cols. [138],
que estudiaron el efecto de Triton X-100 sobre las vesículas del re-
tículo sarcoplásmico mediante técnicas químicas, ultraestructurales
y enzimáticas. En proporciones bajas de detergente / membrana
Detergentes: de los principios físicos a las aplicaciones 79
biofarmacéuticas (o por qué prevenimos la covid-19 con agua y jabón)
Félix M. Goñi y Alicia Alonso
An. Real Acad. Farm. Vol. 87. Nº1 (2021) · pp. 53 - 96
