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DISEÑO
DE
UN
GENOSENSOR…

1,E-06 0,5375 mg/L ALP-Strp
8,E-07 1,075 mg/L ALP-Strp
6,E-07 2,15 mg/L ALP-Strp
4,3 mg/L ALP-Strp

I (A) 4,E-07

2,E-07

0,E+00
0 0,5 1 1,5 2 2,5

C (µM) sonda indicadora

Figura
14.-­-
Influencia
de
sonda
indicadora
en
la
señal
blanco
para
diferentes
concentraciones
de

enzima.

Disminuir
la
cantidad
de
estos
reactivos
podría
afectar
a
la
sensibilidad
del

ensayo
ya
que
constituyen
dos
de
las
etapas
clave
del
marcaje
y
amplificación
de
la

reacción
de
hibridación.
Es
necesario
llegar
a
una
situación
de
compromiso
en

donde
la
intensidad
del
blanco
sea
lo
menor
posible,
sin
disminuir
la
intensidad

que
origina
el
analito.

La
experiencia
siguiente,
se
realizó
para
evaluar
si
las
condiciones

experimentales
óptimas
permitían
la
determinación
de
diferentes
concentraciones

de

analito.
Se
seleccionó
una
concentración
de
sonda
indicadora
de
1
µM,
en

exceso
respecto
al
analito.
Para
esta
concentración
de
sonda,
la
intensidad

generada
por
el
blanco
fue
similar
cuando
las
concentraciones
de
enzima
fueron

5,375·10-­-4
g/L
y
1,075·10-­-3
g/L.
Para
asegurar
que
el
conjugado
enzimático
no

fuera
un
reactivo
limitante
del
diseño
se
tomó
como
valor
de
estudio
1,075·10-­-3

g/L.

En
la
Figura
15,
se
muestra
la
respuesta
de
distintas
concentraciones
de

analito
en
estas
condiciones
experimentales.
Se
observa
una
gran
diferencia
entre

el
blanco
y
0,001
µM
de
analito.

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