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VOL. 73 (4), 1287-1307, 2007 HETEROGENEIDAD MORFOLÓGICA DE LA...

Técnica combinada histoquímica e inmunohistoquímica

Algunos cortes pertenecientes a todos los niveles estriatales fue-
ron seleccionados para visualizar en la misma preparación la distri-
bución de las interneuronas NADPH-d respecto a los distintos com-
partimentos estriatales. Después de tratar los cortes para la técnica
histoquímica de la NADPH-d descrita anteriormente, fueron lavados
abundantemente en PBS durante 2 horas. Después, se realizó la
técnica inmunohistoquímica de la ENK, empleando un anticuerpo
generado en ratón (Medicorp, Montreal, Canadá) a una concentra-
ción 1:50 durante 2 noches, deteniendo la reacción de revelado lo
antes posible para evitar un exceso de fondo que dificultara la obser-
vación de las neuronas.

Técnica de doble inmunohistoquímica

Algunos cortes fueron procesados inmunohistoquímicamente
para la visualización simultánea de las interneuronas colinérgicas y
del compartimento estriosomal (ChAT y ENK). Para ello, tras varios
lavados en PBS y la inactivación de la peroxidasa endógena, los
cortes se incubaron durante dos noches en una solución compuesta
por Tritón X-100 al 0,1%, seroalbúmina bovina al 10%, y los anti-
cuerpos anti-ChAT y anti-ENK. Posteriormente, los cortes fueron
incubados durante 90 minutos a temperatura ambiente con el anti-
cuerpo secundario correspondiente a la ChAT, la solución ABC como
se describió anteriormente, y se reveló con DAB. Tras ello, los cortes
se lavaron durante 30 minutos en PBS, y se incubaron con el anti-
cuerpo secundario específico para la ENK, la solución de ABC, y se
revelaron en una solución constituida por un 0,3% de sulfato amó-
nico de níquel (Fluka, Buchs, Suiza), 0,025% de DAB, y 0,0015% de
H2O2 en tampón Tris pH 7,6. Se obtuvo un precipitado gris oscuro
que contrastaba con el color marrón de la DAB. Algunos cortes fue-
ron procesados sin el anticuerpo primario o el secundario de la
ChAT o la ENK, sirviendo como controles negativos.

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