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M. R. DE FELIPE ANTÓN Y COLS. AN. R. ACAD. NAC. FARM.

3. FACTORES FISIOLÓGICOS BIOQUÍMICOS Y GENÉTICOS
DE LA SIMBIOSIS BRADYRHIZOBIUM-LUPINUS

3.1. Regulación de la concentración de oxígeno
3.1. en los nódulos

El enzima nitrogenasa, responsable de la fijación de nitrógeno, es
inactivada por el oxígeno. La concentración de oxígeno debe estar
limitada en el interior del nódulo, para lo cual la planta cuenta con
varios mecanismos de regulación.

3.1.1. Leghemoglobina (Lh) (hemoglobina de las plantas)

La leghemoglobina es la proteína mayoritaria del nódulo, cuya
función es transportar oxígeno a los bacteroides, transformada en
oxileghemoglobina. Se cree que a su síntesis contribuyen ambos sim-
biontes, bacteria y planta, y aparece cuando el nódulo está formado
morfológicamente. Se la denomina nodulina tardía por expresarse
después del desarrollo morfológico del nódulo. Su presencia es im-
prescindible para que la fijación de nitrógeno pueda realizarse. Para
cumplir esta función el Fe del grupo hemo debe estar en forma re-
ducida (Fe2+), existiendo reductasas en el nódulo para controlar la
oxidación.

Por el importante papel que juega esta proteína, su localización
fue motivo de estudio por diversos laboratorios, siendo los resulta-
dos muy diferentes y contradictorios mediante técnicas bioquímicas.
Nuestro grupo abordó la localización inmuocitoquímica de la Lh.

3.1.2. Localización de la Lh por técnicas inmunocitoquímicas

La proteína se extrajo a partir del extracto de nódulos de lupino
y una vez purificada se obtuvieron los anticuerpos policlonales, ha-
ciendo una caracterización posterior de las inmunoglobulinas. Se
obtuvo un anticuerpo primario con un título muy alto, de gran es-
pecificidad. La localización se realizó con un anticuerpo secundario
cabra-anticonejo, unido a oro coloidal (12).

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