Over-expression of P2Y₂ receptor after silencing in corneal wound healing

Abstract

Diadenosine polyphosphates are a family of dinucleotides with relevant properties in the eye and in other tissues. Diadenosine polyphosphates can activate P2Y and P2X receptors present on the ocular surface, anterior segment and retina. In the cornea, the presence of a P2Y₂, P2Y₄ and P2Y₆ receptor has been identified. Both diadenosine polyphosphates and other purinergic agonists modified corneal wound healing depending on the receptor that is activated by these substances. To confirm the involvement of the P2Y₂ receptor in the wound healing process after the challenge with Ap₄A, we have designed siRNA against P2Y₂ receptor. We have observed that P2Y₂ is localized in the most external layer of the corneal epithelium. The pretreatment with siRNA produced a disappearance of the receptor at 12 and 24 hours after the wound, being the location for P2Y₂ restored 36 hours after the wound. We have also observed that in half of the tested corneas, there was an increase in the P2Y₂ expression after silencing compared to control and Ap₄A treated corneas, being this receptor localized both in corneal epithelium and stroma.

Keywords: Ap4A; P2Y2; siRNA; Corneal wound healing.

Resumen

Los diadenosina polifosfatos son una familia de dinucleótidos con gran relevancia en las propiedades del ojo y de otros tejidos. Estos diadenosina polifosfatos pueden activar los receptores P2Y y P2X presentes en la superficie ocular, en el segmento anterior y en la retina. En la cornea, se ha identificado la presencia de receptores P2Y₂, P2Y₄ y P2Y₆. Tanto los diadenosina polifosfatos como los receptores purinérgicos modifican el proceso de cicatrización corneal dependiendo del tipo de receptor activado por los distintos dinucleótidos. Para localizar el receptor P2Y₂ en córneas lesionadas y tratadas con Ap₄A en presencia o ausencia de un siRNA para el receptor P2Y₂, hemos realizado un ensayo de inmunohistoquímica. Hemos observado que el receptor P2Y2 se localiza en el epitelio tras la lesión corneal y el consecuente tratamiento con Ap₄A. El pre-tratamiento con el siRNA produce la desaparición de la señal para este receptor tanto a las 12 como a las 24 horas de la lesión corneal, siendo la localización de este receptor P2Y₂ recuperada a las 36 horas de la lesión en presencia del siRNA. Además, hemos observado que en la mitad de las córneas analizadas, existía un incremento en la expresión del receptor P2Y₂ tras el silenciamiento del mismo comparado con las córneas control y con las tratadas con Ap₄A, localizando la presencia de este receptor tanto en el epitelio como en el estroma corneal.

Palabras clave: Ap4A; P2Y2; siRNA; Cicatrización corneal