Anales RANF

Dolores Prieto Ocejo @Real Academia Nacional de Farmacia. Spain 291 relajación endotelial de tipo EDH resistente al bloqueo de la NOS y acompañada por una hiperpolarización del MLV renal, cuya naturaleza y origen permanecían por dilucidar (12). En estudios llevados a cabo en nuestro laboratorio en arterias interlobares de la rata, demostramos que el H 2 O 2 es un vasodilatador dependiente del endotelio, ya que las relajaciones no mediadas por NO o prostanoides podían ser inhibidas por la catalasa y miméticos de la glutation peroxidasa como el ebselen. Además, el H 2 O 2 activa canales de K + dependientes de Ca 2+ (K Ca ) en el endotelio e hiperpolariza la células endoteliales iniciando así una respuesta EDH que se propaga al MLV, donde se produce también una hiperpolarización y un descenso del Ca 2+ intracelular que conduce a la relajación de las arterias renales (13). Las enzimas citocromo P450 (CYP) epoxigenasas tienen la capacidad de metabolizar el ácido araquidónico y generar ácidos epoxieicosatrienóicos (EETs) e hidroxieicosatetraeonoicos (HETEs). El riñón tiene una expresión significativa de las enzimas CYP y tanto los EETs como los HETEs actúan en las células del epitelio tubular renal alterando el transporte de sodio. Sin embargo, también se ha atribuido a los derivados del ácido araquidónico por la vía de las CYP epoxigenasas y CYP hidroxilasas, los EETs y HETEs respectivamente, un papel en el control local del flujo sanguíneo renal. El 20-HETE contrae las arteriolas aferentes y contribuye a la autorregulación del flujo sanguíneo renal, mientras que los EETs han sido propuestos como factores hiperpolarizantes dependientes del endotelio (EDHFs) (14). En el endotelio vascular coronario, las enzimas CYP2C son una fuente de ROS, y el inhibidor selectivo de la CYP2C9, sulfafenazol, abole la generación de O 2 .- en células que sobreexpresan esta isoenzima o en células endoteliales estimuladas con bradicinina, si bien potencia pero no inhibe las relajaciones dependientes del endotelio de las arterias coronarias, indicando que las CYP2C epoxigenasas son una fuente de ROS vasoconstrictoras en las arterias coronarias (15). En las arterias intrarrenales de la rata, sin embargo, nuestro grupo ha demostrado que las CYP2C epoxigenasas se expresan en el endotelio renal colocalizadas con la eNOS ( Figura 1 ) y las relajaciones endoteliales sensibles a catalasa y la producción de H 2 O 2 por estimulación del endotelio en arterias intactas son reducidas por el inhibidor de la CYP2C epoxigenasa, lo que sugiere que esta enzima es una fuente de generación de H 2 O 2 vasodilatador en arterias renales (13). 2.1. NADPH oxidasas y sistema vascular Las enzimas NADPH oxidasas de la familia Nox son las únicas enzimas que generan ROS de forma primaria y catalizan la conversión de O 2 en O 2 .- usando NADPH como donante de electrones. Otras enzimas como las COX, las CYP epoxigenasas o las enzimas de la cadena de transporte mitocondrial pueden producir ROS pero como subproductos de su función normal. Las Nox representan una fuente importante de ROS en el sistema vascular y juegan un papel esencial tanto en la salud como en la patología vascular. Las Nox se expresan en abundancia en el plasma y en las membranas plasmática y lisosomal de los fagocitos, neutrófilos y macrófagos, y su activación es responsable del “estallido respiratorio u oxidativo” (Figura 2), proceso por el cual algunas células son capaces de producir y liberar ROS como O 2 .- y H 2 O 2 , con un aumento marcado de la demanda de O 2 por parte de la célula, mecanismo utilizado por las células del sistema inmune para producir compuestos oxidantes -H 2 O 2 y anión hipoclorito- con capacidad microbicida. En función del número de grandes subunidades catalíticas transmembrana, se han identificado 7 homólogos Nox en el genoma humano: de Nox1 a Nox5, Duox1 y Duox2, que difieren en su nivel de expresión y control, en el tipo de ROS que generan y en el control de su activación (16). Todas las Nox son enzimas multi- subunidad en las que las distintas subunidades necesitan formar un complejo para generar ROS. El control de la activación de estas enzimas se ejerce por calcio o por interacciones proteína-proteína, con la excepción de la Nox4 que es constitutivamente activa. La Nox5 depende de calcio y genera anión O 2 .- de forma primaria (17), mientras que el otro grupo de Nox, dependientes de calcio, son la Duox1 y Duox2 que producen H 2 O 2 , aunque su expresión es muy baja en el sistema vascular. El resto de las Nox (Nox1-4) requieren una subunidad, la p22phox, para la estabilización de la subunidad Nox. La Nox4 no requiere ninguna subunidad adicional además de la p22phox para la actividad constitutiva de la enzima y, al igual que las enzimas Duox, parece producir directamente H 2 O 2 . La Nox1, la Nox2 y la Nox3 requieren subunidades citosólicas para su activación. En el modelo clásico, el leucocito, la Nox2 es activada por la p67phox (y la Rac2), y el complejo es fijado a la Nox2 por la p47phox que actúa como adaptador. En el caso de la Nox1, la función activadora de la p67phox es llevada a cabo por NoxA1 ( Nox-Activator1 ) y la función organizadora de la p47phox por la NoxO1 ( Nox-Organizer1 ) (17).