Anales RANF

Vanesa Nozal, Alfonso García-Rubia, Concepción Pérez, Ana Martínez, Valle Palomo @Real Academia Nacional de Farmacia. Spain 270 dos órdenes para el compuesto 10. La actividad inhibitoria de los compuestos iniciales frente a BACE1 también se evaluó, quedando demostrado que ninguna de las estructuras en las que se basaron los fragmentos poseía la capacidad de interaccionar con la proteasa (Tabla 2). Tabla 2 . Estructura química y actividad biológica de los precursores de los fragmentos en sus quinasas correspondientes y en BACE1 Código Estructura PM LRRK2 %inh @10µM o CI 50 (µM) CK1 δ %inh @10µM o CI 50 (µM) GSK3 β %inh @10µM o CI 50 (µM) BACE %inh @10µM o CI 50 (µM) TDZD8 236 - - 2.0 >10 µM IGS4.64 222 3.65 - - >10 µM JZ1.40 272 0.788 - - 25 % IGS2.14 268 - 0.33 - >10 µM 3.2. Química click in-situ Finalmente, tras los resultados exitosos obtenidos con los triazoles multidiana se ha implementado una metodología para seleccionar de manera efectiva nuevos compuestos multidiana. Para ello, se utilizó la química click in situ que, en lugar de utilizar un catalizador metálico para la formación de los triazoles, emplea la enzima como molde de reacción para construir el inhibidor si los fragmentos se colocan de manera adecuada en el centro activo de la proteasa (23). La puesta a punto de la metodología se realizó empezando por los fragmentos 1 y 2, incubados 24h a concentraciones de 30 y 60 µ M, en presencia y ausencia de BACE1. Tras analizar las mezclas por HPLC-MS se observaron picos cuya masa se correspondía al triazol correspondiente, solo en los casos en los que los fragmentos se incubaron con la proteasa (Figura 5). Este nuevo procedimiento permitirá una selección más eficiente de los mejores candidatos sin la necesidad de sintetizar un gran número de moléculas, ahorrando tiempo y costes en el proceso de descubrimiento de estos compuestos multidiana.