Anales RANF

Vanesa Nozal, Alfonso García-Rubia, Concepción Pérez, Ana Martínez, Valle Palomo @Real Academia Nacional de Farmacia. Spain 268 3.1. Síntesis y evaluación biológica in vitro. Una vez se seleccionaron las mejores posiciones para la introducción de los grupos funcionales, se diseñó una ruta sintética basándonos en los reactivos comerciales disponibles y en la eficiencia sintética que nos proporcionara los fragmentos alquino y azida necesarios. Se sintetizaron cinco fragmentos: dos azidas derivadas de inhibidores de LRRK2 y CK1 δ y tres alquinos derivados de GSK3 β , LRRK2 y CK1 δ . La síntesis del inhibidor de GSK3 β presentó algunos retos sintéticos debido a que los reactivos necesarios para la formación del anillo de tiadiazolinonas son isocianatos e isotiocianatos. Ambos son incompatibles con múltiples reacciones químicas. En este caso, la estrategia sintética se cambió ligeramente para obtener el fragmento necesario de manera rápida y eficiente. El anillo aromático necesario para la actividad de GSK3 β se eliminó con la hipótesis de que el anillo de triazol formado tras la química click se posicionaría de una manera similar en el compuesto final. De esta manera el conector se incorporó en la estructura inicial del inhibidor de GSK3 β . Después de la síntesis de todos los fragmentos, y para testar nuestra hipótesis, primero se sintetizó el triazol 3 que posee dos fragmentos inhibidores de LRRK2 de tipo benzotiazol. El compuesto 3 sirvió como prueba de concepto, tanto del mantenimiento de la actividad en LRRK2 como de la nueva actividad biológica del triazol en BACE1. Tras la evaluación biológica, se observó actividad en el rango de bajo micromolar para ambas enzimas lo que confirma nuestra hipótesis inicial (Figura 3, Tabla 1). Figura 3 . Síntesis del primer compuesto multidiana mediante química click catalizada por cobre A continuación, diferentes parejas de fragmentos inhibidores de quinasas se combinaron para obtener otros cuatro triazoles multidiana, que poseyeran actividad en BACE1 y en LRRK2-GSK3 β ( 7 ), CK1 δ -GSK3 β ( 8 ), o CK1 δ -LRRK2 ( 9, 10 ) respectivamente (Figura 4). Figura 4 . Estructura y síntesis de los triazoles 1,2,3-disustituídos La actividad inhibitoria de los compuestos sintetizados se evaluó en sus enzimascorrespondientes así como en BACE1, para establecer si las nuevas estructuras químicas mantenían su potencial inhibitorio (Tabla 1).