Anales RANF

Improved linkage design for the discovery of multitarget ligands as powerful drugs for Alzheimer’s disease @Real Academia Nacional de Farmacia. Spain 265 encontrado: 494,1072. N -(benzo[d]tiazol-2-il)-2-(4-((4-((2-etil-3,5-dioxo-1,2,4- tiadiazolidin-4-il)metil)-1H-1,2,3-triazol-1- il)metil)fenil)acetamida (8) Se utilizó 2-(4-(azidometil)fenil)- N -(benzo[d]tiazol-2- il)acetamida (64 mg, 0.2 mmol) y 3-etil-5-(prop-2-in-1- il)tiazolidin-2,4-diona (37 mg, 0.2 mmol). Rendimiento: 62 mg, 61%. Sólido blanco; pf: 226 – 228 ºC (descomp.). 1 H RMN (300 MHz, DMSO- d 6 ): δ 12.62 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.96 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.43 (td, J = 7.6, 1.2 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.35 – 7.23 (m, 3H), 5.57 (s, 2H), 4.81 (s, 2H), 3.85 (s, 2H), 3.61 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.13 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 13 C RMN (75 MHz, DMSO- d 6 ): δ 170.5, 166.1, 158.4, 152.5, 149.0, 142.0, 135.1, 135.1, 131.9, 130.2 (2C), 128.6 (2C), 126.6, 124.2, 124.0, 122.2, 121.0, 53.0, 41.9, 40.0, 37.5, 14.0. ESI calc para C 23 H 22 N 7 O 3 S 2 [M + H] + 507,1147; encontrado: 507,1156. ( Z )- N -(benzo[d]tiazol-2-il)-2-(4-((4-((4-((2-oxoindolin-3- iliden)amino)fenoxi)metil)-1H-1,2,3-triazol-1- il)metil)fenil)acetamida (9) Se utilizó 2-(4-(azidometil)fenil)- N -(benzo[d]tiazol-2- il)acetamida (64 mg, 0.2 mmol) y ( Z )-3-(4-(prop-2-in-1- iloxi)benciliden)indolin-2-ona (62 mg, 0.2 mmol). Rendimiento: 55 mg, 46%. Sólido naranja; pf: 166 – 168 ºC. 1 H RMN (300 MHz, DMSO- d 6 ): δ 12.5 (s, 1H), 10.89 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.95 – 7.78 (m, 2H), 7.67 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.42 – 7.17 (m, 6H), 7.06 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.94 – 6.86 (m, 2H), 6.82 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.68 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 6.54 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.54 (s, 2H), 5.10 (s, 2H), 3.77 (s, 2H). 13 C RMN (75 MHz, DMSO- d 6 ): δ 170.4, 162.7, 158.2, 156.2, 155.0, 148.8 (2C), 147.2, 143.8, 135.0 (2C), 134.6, 131.8, 130.2 (3C), 128.5 (2C), 126.5, 125.4, 125.1, 123.9, 122.1 (3C), 119.7 (2C), 115.9 (2C), 111.8, 61.71, 53.0, 41.8. ESI calc para C 23 H 26 N 7 O 3 S [M + H] + 600,6765; encontrado: 600,6774. N -(benzo[d]tiazol-2-il)-4-((1-(4-(2-(benzo[d]tiazol-2- ilamino)-2-oxoetil)bencil)-1H-1,2,3-triazol-4- il)metoxi)benzamida (10) Se utilizó 2-(4-(azidometil)fenil)- N -(benzo[d]tiazol-2- il)acetamida (64 mg, 0.2 mmol) y 4-(azidometil)-N- (benzo[d]tiazol-2-il)benzamida (59.0 mg, 0.2 mmol). Rendimiento: 69 mg, 55%. Sólido blanco; pf: 198 – 200 ºC (descomp.). 1 H RMN (300 MHz, DMSO- d 6 ): δ 12.57 (s, 2H), 8.33 (s, 1H), 8.15 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 8.05 – 7.91 (m, 2H), 7.80 – 7.65 (m, 2H), 7.49 – 7.24 (m, 8H), 7.22 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.61 (s, 2H), 5.25 (s, 2H), 3.84 (s, 2H). 13 C RMN (75 MHz, DMSO- d 6 ): δ 170.5, 165.7, 162.8 (2C), 162.1, 158.3, 148.9, 143.0, 135.2, 135.1, 131.9, 130.9 (2C), 130.3 (2C), 128.6 (2C), 126.6 (2C), 125.3, 124.7, 124.0 (2C), 122.2 (2C), 121.0 (2C), 120.7, 115.1 (2C), 61.8, 53.1, 41.9. ESI calc para C 33 H 26 N 7 O 3 S [M + H] + 632,1533; encontrado: 632,1542. 2.3. Estudios de actividad La actividad de los compuestos frente a las diferentes quinasas se evaluó como se detalla a continuación. Ensayo enzimático LRRK2 Los inhibidores de LRRK2 fueron evaluados por la compañía ThermoFisher bajo el siguiente ensayo. El ensayo en sí se puede dividir en dos fases: una fase de reacción de la quinasa y una fase de detección de ADP. En la fase de reacción de la quinasa, todos los componentes requeridos para la reacción se agregan al pocillo, y la reacción se deja incubar durante 60 minutos. Pasado este tiempo, se agrega una solución de detección que consiste en un anticuerpo anti-ADP marcado con europio, un marcador ADP marcado con Alexa Fluor ™ 647 y AEDT (para detener la reacción de la quinasa). El ADP formado por la reacción de la quinasa (en ausencia de un inhibidor) desplazará el marcador ADP marcado con Alexa Fluor 647 del anticuerpo, dando como resultado una disminución en la señal TR-FRET. En presencia de un inhibidor, la cantidad de ADP formada por la reacción de la quinasa se reduce, y la interacción resultante del anticuerpo traza da como resultado una señal alta de TR-FRET. La formación de ADP se determina calculando la relación de emisión del