Anales RANF

Vanesa Nozal, Alfonso García-Rubia, Concepción Pérez, Ana Martínez, Valle Palomo @Real Academia Nacional de Farmacia. Spain 262 molecular afecta directamente a las propiedades farmacocinéticas como la penetración de la barrera hematoencefálica o la biodisponibilidad oral. Por tanto, la estrategia de combinación, seguida de la fusión son las más deseables para mantener un peso molecular moderado. La estrategia de unión implica la adición de grupos funcionales que permitan conectar ambos esqueletos moleculares, aumentando el peso molecular del compuesto resultante. Sin embargo, esta estrategia ofrece la posibilidad de conectar los fragmentos de las moléculas originales de forma que mantengan su actividad inicial y sus interacciones con la diana. Esta tarea resulta muy complicada en el caso de la fusión y la combinación. Por este motivo, la estrategia de unión resulta la más apropiada para mantener la funcionalidad original de los esqueletos combinados. La posición del conector resulta de extrema importancia y se debe prestar especial atención al diseño para evitar disminuir las interacciones entre el ligando y la diana. Además, siguiendo esta estrategia se esperan variaciones mínimas de la actividad biológica del ligando multidiana respecto a la actividad inicial de los fragmentos, de manera que serán necesarios menos ciclos de optimización para obtener el fármaco final deseado. Así, para el diseño de una molécula capaz de modular el progreso de la neurodegeneración presente en la EA utilizaremos la estrategia de unión, eligiendo un conector que además de realizar la función de unión de fragmentos nos proporcionará una tercera actividad biológica. El conector serviría entonces de nexo, así como de motivo de interacción con una tercera entidad biológica. Finalmente, y para facilitar el proceso de selección de la mejor molécula multidiana de manera eficiente, hemos implementado la metodología de química click in situ. Esta metodología utiliza una de las enzimas diana, BACE1, como molde de reacción, de manera que se pueden combinar diferentes fragmentos y que la propia enzima catalice la reacción de formación de la molécula multidiana que se una de manera preferente al centro activo. En este trabajo se describen el diseño, la síntesis y la evaluación biológica de cinco nuevos compuestos multidiana diseñados de manera innovadora con la estrategia de unión, así como una nueva metodología de selección de los mejores candidatos mediante la química click in situ. 2. MATERIALES Y MÉTODOS 2.1. General Los reactivos se obtuvieron de diferentes casas comerciales y se usaron sin realizarles ningún tratamiento posterior. La purificación de los crudos de reacción se llevó a cabo mediante columnas cromatográficas, bien a presión media usando silica gel E. Merck, Grado 60, tamaño de partícula 0.040–0.063 mm, malla 230–240 ASTM o bien utilizando el Sistema de IsoleraOne de Biotage. El eluyente utilizado se especifica en cada caso. Los datos espectroscópicos de 1 H RMN and 13 C RMN se obtuvieron en un espectrómetro Bruker AV300 MHz. Los desplazamientos químicos se expresan en ppm. Las señales de multiplicidad (bs: singlete ancho, s: singlete, d: doblete, dd: doble doblete, ddd:doble doble doblete t: triplete, td: triple doblete m: multiplete, q: cuadruplete) y las constantes de acoplamiento ( J =Hz) se indican para cada molécula. Los datos espectroscópicos se analizaron con el software MestreNova 10.0. Para los experimentos llevados a cabo con microondas se utilizó el equipo Biotage Initiator. Dichos experimentos se realizaron en el modo de control de temperatura y en viales sellados y especiales para dicho equipo. La temperatura se mide mediante un sensor de IR colocado en el reactor del microondas. La agitación de dichas reacciones se llevó a cabo mediante la presencia de una barrita magnética. Los datos de HPLC- MS se obtuvieron con el equipo FinniganTM LXQ TM procedente de Termofisher. Los valores de punto de fusión de los diferentes compuestos fueron determinados en un equipo Büchi Melting Point M-560. 2.2. Síntesis de los fragmentos alquino y azida Síntesis de 4-(azidometil)- N -(benzo[d]tiazol-2- il)benzamida (1) Se disolvieron en DMF (10 mL) 354 mg de ácido 4- (azidometil)benzoico (2.0 mmol), 383 mg de EDCI (4.0 mmol) y 488 mg de DMAP (2.0 mmol). A continuación, tras 5 min de agitación a t.a., se añadieron 300 mg de 2- amino-benzotiazol (2.0 mmol). La mezcla resultante se dejó en agitación durante toda una noche a la misma temperatura. Se añadió agua (35 mL) y AcOEt (35 mL). La fase orgánica resultante se lavó consecutivamente con disoluciones saturadas de NaHCO 3 y NaCl. Se evaporó el disolvente de la fase orgánica bajo presión reducida y el crudo de reacción obtenido se purificó mediante cromatografía en columna usando hexano/acetato de etilo 9:1 como eluyente, obteniéndose finalmente un sólido blanco (426 mg, 69% de rendimiento). 1 H RMN (300 MHz, DMSO- d 6 ): δ 12.95 (s, 1H), 8.19 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 8.03 (d, J = 7.6, 1.2 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.48 (dd, J = 8.2, 1.3 Hz, 1H), 7.35 (td, J = 7.6, 1.2 Hz, 1H), 4.60 (s, 2H). 13 C RMN (75 MHz, DMSO- d 6 ): δ 166.1, 159.3, 148.9, 141.1, 131.2 (2C), 129.2 (2C), 128.8 (2C), 126.7, 124.2, 122.2, 120.8, 53.5. ESI calc para C 15 H 11 N 5 OS [M + H] + 310,0757; encontrada: 310,0765. Síntesis de 2-(4-(azidometil)fenil)- N -(benzo[d]tiazol-2- il)acetamida (4) Preparación de cloruro de 2-(4-(bromometil)fenil)acetilo Sobre una disolución de 2.35 g (10 mmol) de ácido 2- (4-(bromometil)fenil)acético en 15 mL de cloroformo se añadieron 3.85 g (32 mmol) de cloruro de tionilo. La mezcla se calentó a 70 ºC durante 6 horas obteniéndose