Diseño de un genosensor electroquímico para la detección indirecta de gluten en alimentos

Begoña Martín Fernández, Carmen Lorena Manzanares Palenzuela, Marta Sánchez-Paniagua López, Beatriz López Ruiz, Gloria Frutos Cabanillas

Resumen


Se propone un nuevo genosensor electroquímico para la detección de una secuencia específica de ADN que codifica un fragmento inmunogénico de la α-2-gliadina, proteína del gluten de trigo responsable de la celiaquía.. El diseño del genosensor se basa en la formación de una monocapa autoensamblada de sonda de captura y un agente bloqueante, mercaptohexanol, sobre electrodos de oro serigrafiados. Se eligió un ensayo tipo sándwich, utilizando una sonda indicadora marcada con biotina y el conjugado estreptavidina-fosfatasa alcalina como molécula de marcaje. La detección del analito se basó en la medida de la corriente de oxidación del 1-naftol, producto formado por la hidrólisis enzimática del 1-naftil-fosfato, mediante voltamperometría de pulso diferencial. Se investigaron y optimizaron los parámetros implicados en la composición de la fase sensora mediante voltametría cíclica, encontrándose como relación óptima sonda de captura:mercaptohexanol 2 µM:9 mM. Con el objetivo de minimizar las adsorciones inespecíficas, se optimizaron las concentraciones de sonda indicadora y conjugado enzima-estreptavidina, especies involucradas en la fase de medida, obteniéndose como valores óptimos 1 µM and 1,075x10-3 g/L respectivamente. El genosensor propuesto presentó una respuesta lineal entre 20 y 250 nM.

Palabras clave


Genosensor; Voltamperometría; Monocapa autoensamblada; Gluten; α-2-gliadina.

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